دا مقاله د "د ناروغیو او آفتونو په وړاندې د لوبیا د مقاومت ښه کول" د څیړنې موضوع یوه برخه ده، ټولې 5 مقالې وګورئ.
د فنګسي نباتاتو د ناروغۍ نیکروسس سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم (لیب.) ډی باری د څو پوړیزه ستراتیژۍ څخه کار اخلي ترڅو مختلف کوربه نباتات اخته کړي. دا څیړنه د ډایمین L-ornithine کارولو وړاندیز کوي، یو غیر پروټین امینو اسید چې د نورو اړینو امینو اسیدونو ترکیب هڅوي، د بدیل مدیریت ستراتیژۍ په توګه د Pseudomonas sclerotiorum له امله رامینځته شوي سپین فنګس ته د Phaseolus vulgaris L. مالیکولي، فیزولوژیکي او بایو کیمیکل غبرګونونه لوړ کړي. د ویټرو تجربو ښودلې چې L-ornithine د خوراک پورې تړلي ډول د S. pyrenoidosa د مایسیلیال وده د پام وړ منع کړې. سربیره پردې، دا کولی شي د شنو خونو شرایطو لاندې د سپین فنګس شدت د پام وړ کم کړي. سربیره پردې، L-ornithine د درملنې شوي نباتاتو وده هڅولې، دا په ګوته کوي چې د L-ornithine ازمول شوي غلظت د درملنې شوي نباتاتو لپاره فایټوټوکسیک نه و. سربیره پردې، L-ornithine د غیر انزایمیک انټي اکسیډنټونو (ټول محلول فینولیکونه او فلاوونایډونه) او انزایمیک انټي اکسیډنټونو (catalase (CAT)، peroxidase (POX)، او polyphenol oxidase (PPO)) څرګندونه زیاته کړه، او د دریو انټي اکسیډنټونو پورې اړوند جینونو (PvCAT1، PvSOD، او PvGR) څرګندونه یې زیاته کړه. سربیره پردې، په سیلیکو تحلیل کې د S. sclerotiorum جینوم کې د پوټیټیو oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) پروټین شتون څرګند شو، کوم چې د فعال تحلیل، ساتل شوي ډومینونو، او ټوپولوژي له مخې د Aspergillus fijiensis (AfOAH) او Penicillium sp. (PlOAH) د oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) پروټینونو سره خورا ورته و. په زړه پورې خبره دا ده چې د کچالو ډیکسټروز بروت (PDB) میډیم ته د L-ornithine اضافه کول د S. sclerotiorum mycelia کې د SsOAH جین څرګندونه د پام وړ کمه کړه. په ورته ډول، د L-ornithine بهرنۍ استعمال د درملنې شوي بوټو څخه راټول شوي فنګسي مایسیلیا کې د SsOAH جین څرګندونه د پام وړ کمه کړه. په پای کې، د L-ornithine کارولو د PDB منځنیو او اخته پاڼو دواړو کې د اکسالیک اسید سرایت د پام وړ کم کړ. په پایله کې، L-ornithine د ریډوکس حالت ساتلو او همدارنګه د اخته نباتاتو د دفاعي غبرګون لوړولو کې کلیدي رول لوبوي. د دې مطالعې پایلې ممکن د سپین فنګس کنټرول لپاره د نوښتګرو، چاپیریال دوستانه میتودونو په پراختیا کې مرسته وکړي او د لوبیا تولید او نورو فصلونو باندې د هغې اغیز کم کړي.
سپین فنګس، چې د نیکروټروفیک فنګس سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم (لیب.) ډی باری له امله رامینځته کیږي، یوه ویجاړونکې، حاصل کموونکې ناروغي ده چې د نړیوال لوبیا (فیزولس ولګاریس ایل.) تولید لپاره جدي ګواښ رامینځته کوي (بولټن او نور، 2006). سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم د خاورې څخه رامینځته شوي فنګسي نباتاتو ناروغیو څخه یو له خورا ستونزمن کنټرول څخه دی، د 600 څخه زیاتو نباتاتو ډولونو پراخه کوربه لړۍ او په غیر مشخص ډول د کوربه نسجونو په چټکۍ سره د میکریټ کولو وړتیا لري (لیانګ او رولینز، 2018). د نامناسب شرایطو لاندې، دا د خپل ژوند دورې یو مهم پړاو څخه تیریږي، د اوږدې مودې لپاره د تور، سخت، تخم په څیر جوړښتونو په توګه چې په خاوره کې 'سکلیروټیا' نومیږي یا د اخته نباتاتو په مایسیلیم یا ډډ کې د سپین، نرم ودې په توګه پاتې کیږي (شوارټز او نور، 2005). ایس سکلیروټیوریم د سکلیروټیا جوړولو وړتیا لري، کوم چې دا اجازه ورکوي چې په اخته شویو ځمکو کې د اوږدې مودې لپاره ژوندي پاتې شي او د ناروغۍ په جریان کې دوام وکړي (شوارټز او نور، ۲۰۰۵). سکلیروټیا په مغذي موادو کې بډایه دي، کولی شي په خاوره کې د اوږدې مودې لپاره دوام وکړي، او د راتلونکو انتاناتو لپاره د لومړني انکولم په توګه کار وکړي (شوارټز او نور، ۲۰۰۵). د مناسبو شرایطو لاندې، سکلیروټیا ټوکیږي او د هوا له لارې سپورونه تولیدوي چې کولی شي د نبات ټولې پورته ځمکې برخې اخته کړي، پشمول د ګلونو، ډډونو، یا پوډونو (شوارټز او نور، ۲۰۰۵).
سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم د خپلو کوربه نباتاتو د اخته کولو لپاره څو اړخیزه ستراتیژي کاروي، چې د سکلیروټیل ټوکیدنې څخه تر نښو پراختیا پورې د همغږۍ پیښو لړۍ پکې شامله ده. په پیل کې، ایس سکلیروټیوریوم د مرخیړیو په څیر جوړښتونو څخه معطل شوي سپورونه (د اسکوسپور په نوم یادیږي) تولیدوي چې اپوتیسیا نومیږي، کوم چې هوا کیږي او د اخته شوي نبات په کثافاتو کې غیر حرکت سکلیروټیا ته وده ورکوي (بولټن او نور، 2006). فنګس بیا د نباتاتو د حجرو دیوال pH کنټرولولو لپاره، د انزایمیک تخریب او نسج یرغل ته وده ورکولو لپاره (هیګیډوس او ریمر، 2005)، او د کوربه نبات د اکسیډیټیو برسټ فشارولو لپاره اکسالیک اسید، یو ویروسي فکتور پټوي. دا تیزابیت پروسه د نبات د حجرو دیوال کمزوری کوي، د فنګسي حجرو دیوال تخریب کونکي انزایمونو (CWDEs) د نورمال او مؤثره عملیاتو لپاره مناسب چاپیریال چمتو کوي، چې رنځجن ته اجازه ورکوي چې فزیکي خنډ له منځه یوسي او کوربه نسجونو ته ننوځي (مارسیانو او نور، 1983). کله چې ننوځي، S. sclerotiorum یو شمیر CWDEs پټوي، لکه polygalacturonase او cellulase، کوم چې په اخته نسجونو کې د هغې خپریدل اسانه کوي او د نسج نیکروسس لامل کیږي. د زخمونو او هایفال میټونو پرمختګ د سپینې فنګس ځانګړتیاو نښو ته لار هواروي (هیګیډوس او ریمر، 2005). په ورته وخت کې، کوربه نباتات د نمونې پیژندنې ریسیپټرونو (PRRs) له لارې د رنځجن سره تړلي مالیکولي نمونې (PAMPs) پیژني، د سیګنال پیښو لړۍ رامینځته کوي چې په نهایت کې دفاعي غبرګونونه فعالوي.
د ناروغیو د کنټرول د لسیزو هڅو سره سره، په لوبیا کې د کافي مقاومت لرونکي جرمپلازم کمښت پاتې دی، لکه څنګه چې په نورو سوداګریزو فصلونو کې، د ناروغۍ د مقاومت، بقا او تطابق له امله. له همدې امله د ناروغیو مدیریت خورا ننګونکی دی او یوې مدغم، څو اړخیزې ستراتیژۍ ته اړتیا لري چې پکې د کلتوري کړنو، بیولوژیکي کنټرول، او کیمیاوي فنګس وژونکو ترکیب شامل وي (O'Sullivan et al., 2021). د سپینې فنګس وژونکو کیمیاوي کنټرول ترټولو مؤثر دی ځکه چې فنګس وژونکي، کله چې په سمه توګه او په مناسب وخت کې پلي شي، کولی شي په مؤثره توګه د ناروغۍ خپریدل کنټرول کړي، د انتان شدت کم کړي، او د حاصلاتو زیانونه کم کړي. په هرصورت، د فنګس وژونکو ډیر کارول او ډیر تکیه کولی شي د S. sclerotiorum د مقاومت لرونکي ډولونو د راڅرګندیدو لامل شي او د غیر هدف لرونکي ژوندی موجوداتو، د خاورې روغتیا، او د اوبو کیفیت باندې منفي اغیزه وکړي (Le Cointe et al., 2016; Ceresini et al., 2024). له همدې امله، د چاپیریال دوستانه بدیلونو موندل یو لوړ لومړیتوب ګرځیدلی.
پولی امینز (PAs)، لکه پوټریسین، سپرمیډین، سپرمین، او کاډاورین، کولی شي د خاورې څخه رامینځته شوي نباتاتو ناروغیو پروړاندې د امید وړ بدیلونو په توګه کار وکړي، په دې توګه د خطرناک کیمیاوي فنګس وژونکو کارول په بشپړ یا جزوي ډول کموي (نیله او نور، 2024؛ یی او نور، 2024). په لوړو نباتاتو کې، PAs په ډیری فزیولوژیکي پروسو کې دخیل دي، پشمول د حجرو ویش، توپیر، او ابیوټیک او بایوټیک فشارونو ته ځواب (کیلیني او نهیلا، 2020). دوی کولی شي د انټي اکسیډنټ په توګه عمل وکړي، د غبرګون لرونکي اکسیجن ډولونو (ROS) پاکولو کې مرسته وکړي، د ریډوکس هوموستاسیس وساتي (نیهلا او کیلیني، 2023)، د دفاع پورې اړوند جینونه هڅوي (رومیرو او نور، 2018)، مختلف میټابولیک لارې تنظیموي (نیهلا او کیلیني، 2023)، د انډوجینس فایټو هورمونونه تعدیل کوي (نیهلا او کیلیني، 2019)، سیسټمیک ترلاسه شوي مقاومت (SAR) رامینځته کوي، او د نباتاتو-پیتوجن تعاملات تنظیموي (نیهلا او کیلیني، 2020؛ اسیجا او نور، 2022؛ زیروونیک، 2022). دا د یادونې وړ ده چې د نباتاتو په دفاع کې د PAs ځانګړي میکانیزمونه او رولونه د نباتاتو ډولونو، رنځجنونو، او چاپیریالي شرایطو پورې اړه لري توپیر لري. په نباتاتو کې ترټولو زیات PA د اړین پولیمین L-ornithine (کیليني او نهیلا، 2020) څخه بایوسینتیز شوی دی.
L-ornithine د نباتاتو په وده او پرمختګ کې ګڼ رول لوبوي. د مثال په توګه، پخوانیو مطالعاتو ښودلې چې په وریجو کې (Oryza sativa)، اورنیتین ممکن د نایتروجن بیا کارولو سره تړاو ولري (Liu et al., 2018)، د وریجو حاصلات، کیفیت او بوی (Lu et al., 2020)، او د اوبو فشار غبرګون (Yang et al., 2000). سربیره پردې، د L-ornithine بهرنۍ کارول د شکر چوغندر (Beta vulgaris) (Hussein et al., 2019) کې د وچکالۍ زغم د پام وړ لوړ کړی او په پیاز (Allium Cepa) (Çavuşoǧlu and Çavuşoǧlu, 2021) او کاجو (Anacardium occidentale) بوټو (da Rocha et al., 2012) کې د مالګې فشار کم کړی. د ابیوټیک فشار دفاع کې د L-ornithine احتمالي رول ممکن د درملنې شوي بوټو کې د پرولین راټولولو کې د هغې د ښکیلتیا له امله وي. د مثال په توګه، د پرولین میتابولیزم پورې اړوند جینونه، لکه اورنیتین ډیلټا امینوټرانسفیریز (ډیلټا-OAT) او پرولین ډیهایډروجنیز (ProDH1 او ProDH2) جینونه، مخکې راپور شوي چې د غیر کوربه سیوډوموناس سرینګا سټرینونو (سینتیل-کمار او میسور، 2012) په وړاندې د نیکوتیانا بینټامیانا او عربیډوپسیس تالیانا په دفاع کې ښکیل دي. له بلې خوا، د رنځجن ودې لپاره فنګسي اورنیتین ډیکاربوکسیلیز (ODC) اړین دی (سینګ او نور، 2020). د کوربه هڅول شوي جین خاموش کولو (HIGS) له لارې د فوساریوم آکسیسپوروم f. sp. لایکوپرسیسي ODC په نښه کول د فوساریوم مړاوي کیدو په وړاندې د روميانو بوټو مقاومت د پام وړ لوړ کړ (سینګ او نور، 2020). په هرصورت، د بایوټیک فشارونو لکه فایټوپیتوجنونو په وړاندې د خارجي اورنیتین غوښتنلیک احتمالي رول ښه مطالعه شوی نه دی. تر ټولو مهمه دا چې د ناروغیو په مقاومت او ورسره تړلي بایو کیمیکل او فیزیولوژیکي پدیدې باندې د اورنیټین اغیزې په لویه کچه ناڅرګندې پاتې دي.
د دانه لرونکو نباتاتو د S. sclerotiorum انتان پیچلتیا پوهیدل د مؤثره کنټرول ستراتیژیو پراختیا لپاره مهم دي. پدې څیړنه کې، موږ موخه دا وه چې د سکلیروټینیا سکلیروټیوروم انتان په وړاندې د دانه لرونکو نباتاتو د دفاعي میکانیزمونو او مقاومت لوړولو کې د ډایمین L-ornithine احتمالي رول وپیژنو. موږ فرض کوو چې د اخته نباتاتو د دفاعي غبرګونونو د لوړولو سربیره، L-ornithine د ریډوکس حالت ساتلو کې هم کلیدي رول لوبوي. موږ وړاندیز کوو چې د L-ornithine احتمالي اغیزې د انزایمیک او غیر انزایمیک انټي اکسیډنټ دفاعي میکانیزمونو تنظیم او د فنګسي رنځجنیت / ویروس فکتورونو او اړوند پروټینونو سره مداخله پورې اړه لري. د L-ornithine دا دوه ګونی فعالیت دا د سپین فنګسي اغیزې کمولو او د دې قوي فنګسي رنځجن په وړاندې د عامو دانه لرونکو فصلونو مقاومت لوړولو لپاره د دوامداره ستراتیژۍ لپاره یو ژمن نوماند ګرځوي. د اوسني مطالعې پایلې ممکن د سپین فنګسي کنټرول او د دانه لرونکو نباتاتو په تولید باندې د هغې اغیز کمولو لپاره د نوښتګر، چاپیریال دوستانه میتودونو پراختیا کې مرسته وکړي.
په دې څیړنه کې، د عام لوبیا یو حساس سوداګریز ډول، ګیزا ۳ (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza ۳)، د تجربوي موادو په توګه کارول شوی و. صحي تخمونه په مهربانۍ سره د لوبیا د څیړنې څانګې، د کرنې د څیړنې انسټیټیوټ (FCRI)، د کرنې د څیړنې مرکز (ARC)، مصر لخوا چمتو شوي وو. پنځه تخمونه په پلاستيکي لوښو کې کرل شوي وو (داخلي قطر ۳۵ سانتي متره، ژوروالی ۵۰ سانتي متره) چې د شنو خونو شرایطو لاندې د S. sclerotiorum اخته خاورې څخه ډک شوي وو (۲۵ ± ۲ °C، نسبي رطوبت ۷۵ ± ۱٪، ۸ ساعته رڼا/۱۶ ساعته تیاره). د کرلو وروسته په ۷-۱۰ ورځو کې (DPS)، تخمونه نري شوي وو ترڅو یوازې دوه تخمونه چې یوشان وده لري او په هر لوښي کې درې په بشپړه توګه پراخې شوې پاڼې پاتې شي. ټول ګلدان شوي بوټي په هرو دوو اونیو کې یو ځل اوبه شوي وو او د ورکړل شوي نوعې لپاره په میاشت کې په وړاندیز شوي نرخ سره سره القاح شوي وو.
د L-ornithinediamin (چې د (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic acid په نوم هم پیژندل کیږي؛ Sigma-Aldrich، Darmstadt، جرمني) د 500 mg/L غلظت چمتو کولو لپاره، 50 mg لومړی په 100 ml تعقیم شوي تقطیر شوي اوبو کې حل شو. د سټاک محلول بیا حل شو او په راتلونکو تجربو کې وکارول شو. په لنډه توګه، د L-ornithine غلظت شپږ لړۍ (12.5، 25، 50، 75، 100، او 125 mg/L) په ویټرو کې ازمول شوي. سربیره پردې، تعقیم شوي تقطیر شوي اوبه د منفي کنټرول (Mock) په توګه کارول شوې او سوداګریز فنګس وژونکي "Rizolex-T" 50٪ د لندبل وړ پوډر (toclofos-methyl 20٪ + thiram 30٪؛ KZ-Kafr El Zayat د آفت وژونکو او کیمیاوي شرکتونو شرکت، Kafr El Zayat، Gharbia Governorate، مصر) د مثبت کنټرول په توګه کارول شوې. سوداګریز فنګس وژونکی "ریزولیکس-ټي" په پنځو غلظتونو (۲، ۴، ۶، ۸ او ۱۰ ملی ګرامه/لیتر) کې په ویټرو کې ازمول شوی.
د عامو لوبیا ډډونو او پوډرو نمونې چې د سپینې فنګس نښې نښانې ښیې (د اخته کیدو کچه: 10-30٪) د سوداګریزو فارمونو څخه راټولې شوې. که څه هم ډیری اخته شوي نباتات د ډولونو / ډولونو (د حساس سوداګریز ډول ګیزا 3) لخوا پیژندل شوي، نور، په ځانګړي توګه هغه چې له سیمه ایزو بازارونو څخه ترلاسه شوي، د نامعلومو ډولونو څخه وو. راټول شوي اخته شوي مواد لومړی د 0.5٪ سوډیم هایپوکلورایټ محلول سره د 3 دقیقو لپاره سطحه غیر منتن شوي، بیا څو ځله د تعقیم شوي اوبو سره مینځل شوي او د اضافي اوبو لرې کولو لپاره د تعقیم فلټر کاغذ سره وچ شوي. بیا اخته شوي ارګانونه د منځني نسج (روغ او اخته شوي نسجونو ترمنځ) څخه په کوچنیو ټوټو کې پرې شوي، د کچالو ډیکسټروز اګر (PDA) میډیم کې کرل شوي او د 25 ± 2 ° C په تودوخه کې د 12 ساعتونو رڼا / 12 ساعتونو تیاره دوره سره د 5 ورځو لپاره انکیوبیټ شوي ترڅو سکلیروتیا رامینځته کړي. د مایسیلیال ټیپ میتود د مخلوط یا ککړ شوي کلتورونو څخه د فنګسي جلا کولو پاکولو لپاره هم کارول کیده. پاک شوی فنګسي جلا شوی لومړی د هغې د کلتوري مورفولوژیکي ځانګړتیاو پراساس وپیژندل شو او بیا د مایکروسکوپي ځانګړتیاو پراساس د S. sclerotiorum په توګه تایید شو. په پای کې، ټول پاک شوي جلا شوي د حساس عام لوبیا کښت ګیزا 3 باندې د ناروغۍ لپاره ازمول شوي ترڅو د کوچ پوسټولیټونه پوره کړي.
برسېره پردې، تر ټولو برید کوونکی S. sclerotiorum isolate (isolate #3) د داخلي لیکل شوي فاصله کونکي (ITS) ترتیب پراساس نور هم تایید شو لکه څنګه چې د وایټ او نورو لخوا تشریح شوی، 1990؛ باتورو-سیسنیوسکا او نورو لخوا، 2017. په لنډه توګه، isolates د کچالو ډیکسټروز شوروا (PDB) کې کرل شوي او د 5-7 ورځو لپاره په 25 ± 2 °C کې اچول شوي. بیا فنګسي مایسیلیم راټول شوی، د پنیر له لارې فلټر شوی، دوه ځله د تعقیم اوبو سره مینځل شوی، او د تعقیم فلټر کاغذ سره وچ شوی. جینومیک DNA د Quick-DNA™ فنګسي/باکتریا مینیپریپ کټ (Kuramae-Izioka، 1997؛ Atallah et al.، 2022، 2024) په کارولو سره جلا شوی. بیا د ITS rDNA سیمه د ځانګړي پرائمر جوړه ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC؛ تمه شوې اندازه: 540 bp) په کارولو سره پراخه شوه (Baturo-Ciesniewska et al., 2017). پاک شوي PCR محصولات د ترتیب لپاره وسپارل شول (Beijing Aoke Dingsheng Biotechnology Co., Ltd.). د ITS rDNA ترتیبونه د سنجر ترتیب کولو میتود په کارولو سره په دوه اړخیزه توګه ترتیب شوي وو. راټول شوي پوښتنې ترتیبونه بیا د BLASTn سافټویر په کارولو سره د GenBank او د بایو ټیکنالوژۍ معلوماتو ملي مرکز (NCBI، http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) کې د وروستي معلوماتو سره پرتله شول. د پوښتنې ترتیب د 20 نورو S. sclerotiorum strains/isolates سره پرتله شو چې د NCBI GenBank (ضمیمه جدول S1) کې د وروستي معلوماتو څخه ترلاسه شوي چې د مالیکولر ارتقايي جینیات تحلیل کڅوړه (MEGA-11؛ نسخه 11) کې د ClustalW په کارولو سره ترلاسه شوي (Kumar et al., 2024). د ارتقا تحلیل د اعظمي احتمال میتود او د عمومي وخت بیرته راګرځیدونکي نیوکلیوټایډ بدیل ماډل (نی او کمار، ۲۰۰۰) په کارولو سره ترسره شو. هغه ونه چې د لرګیو لوړ احتمال لري ښودل شوې. د هوریسټیک لټون لپاره لومړنۍ ونه د هغه ونې په غوره کولو سره غوره کیږي چې د ګاونډي سره یوځای کیدونکي (NJ) ونې (کومار او نور، ۲۰۲۴) او اعظمي پارسیموني (MP) ونې ترمنځ د لوړې لاګیو احتمال لري. د NJ ونې د جوړې په څیر د واټن میټریکس په کارولو سره جوړه شوې وه چې د عمومي وخت بیرته راګرځیدونکي ماډل (نی او کمار، ۲۰۰۰) په کارولو سره محاسبه شوې وه.
د L-ornithine او باکتریا وژونکي "Rizolex-T" د باکتریا ضد فعالیت د اګر خپریدو میتود لخوا په ویټرو کې ټاکل شوی و. طریقه: د L-ornithine د سټاک محلول (500 mg/L) مناسب مقدار واخلئ او په بشپړ ډول یې د PDA مغذي موادو د 10 ملی لیتر سره مخلوط کړئ ترڅو په ترتیب سره د 12.5، 25، 50، 75، 100 او 125 mg/L وروستي غلظت سره محلولونه چمتو کړئ. د فنګس وژونکو "Rizolex-T" پنځه غلظتونه (2، 4، 6، 8 او 10 mg/L) او جراثیم ضد اوبه د کنټرول په توګه کارول شوي. وروسته له دې چې منځنی جامد شو، د سکلیروټینیا سکلیروټیوریم کلچر یو تازه چمتو شوی مایسیلیال پلګ، چې قطر یې 4 ملي میتر دی، د پیټري ډش مرکز ته لیږدول شوی او په 25±2°C کې کرل شوی تر هغه چې مایسیلیم ټول کنټرول پیټري ډش پوښلی وي، چې وروسته د فنګسي وده ثبت شوې. د مساوات ۱ په کارولو سره د S. sclerotiorum د شعاعي ودې د مخنیوي سلنه محاسبه کړئ:
تجربه دوه ځله تکرار شوه، د هر کنټرول/تجرباتي ګروپ لپاره شپږ بیولوژیکي نقلونه او د هر بیولوژیکي نقل لپاره پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات). هر بیولوژیکي نقل دوه ځله تحلیل شو (دوه تخنیکي نقلونه) ترڅو د تجربوي پایلو دقت، اعتبار او تکثیر ډاډمن شي. برسېره پردې، د پروبیټ ریګریشن تحلیل د نیم اعظمي مخنیوي غلظت (IC50) او IC99 (پرینټیس، 1976) محاسبه کولو لپاره کارول شوی و.
د شنو خونو په شرایطو کې د L-ornithine د ظرفیت ارزولو لپاره، د لوښو دوه پرله پسې تجربې ترسره شوې. په لنډه توګه، لوښي د تعقیم شوي خټې-شګې خاورې (3:1) څخه ډک شوي او د S. sclerotiorum د تازه چمتو شوي کلتور سره واکسین شوي. لومړی، د S. sclerotiorum (isolate #3) ترټولو برید کوونکی جلا کول د یو سکلیروټیم په نیمایي کې پرې کولو سره، د PDA په مخ کې کیښودل او د 4 ورځو لپاره په دوامداره تیاره (24 ساعته) کې د 25 درجو سانتي ګراد کې د مایسیلیال ودې هڅولو لپاره انکیوبیټ کولو سره کرل شوي. بیا د 5 ملي میتر قطر څلور اګر پلګونه د مخکښې څنډې څخه اخیستل شوي او د غنمو او وریجو د سبو د 100 ګرامه تعقیم مخلوط سره واکسین شوي (1:1، v/v) او ټول فلاسکونه د 5 ورځو لپاره د 12 ساعتونو رڼا / 12 ساعتونو تیاره دوره لاندې په 25 ± 2 °C کې د سکلیروټیا جوړښت هڅولو لپاره انکیوبیټ شوي. د ټولو فلاسکونو مینځپانګه په بشپړه توګه مخلوط شوې ترڅو د خاورې اضافه کولو دمخه د یووالي ډاډ ترلاسه شي. بیا، د هر لوښي ته د 100 ګرامه د کولمونیزینګ بران مخلوط اضافه شو ترڅو د ناروغیو دوامداره غلظت ډاډمن شي. واکسین شوي لوښي د فنګس ودې فعالولو لپاره اوبه شوي او د 7 ورځو لپاره په شنو خونو کې کیښودل شوي.
بیا د ګیزا ۳ ډول پنځه تخمونه په هر لوښي کې وکرل شول. د هغو لوښو لپاره چې د L-ornithine او فنګس وژونکي Rizolex-T سره درملنه شوي وو، تعقیم شوي تخمونه لومړی د دوو مرکبونو په اوبو محلول کې د دوه ساعتونو لپاره ډوب شول چې وروستی IC99 غلظت یې شاوخوا 250 mg/L او 50 mg/L و، او بیا د کښت کولو دمخه د یو ساعت لپاره په هوا کې وچ شول. له بلې خوا، تخمونه د منفي کنټرول په توګه په تعقیم شوي اوبو کې ډوب شول. د 10 ورځو وروسته، د لومړۍ اوبه کولو دمخه، تخمونه نري شول، او په هر لوښي کې یوازې دوه پاک تخمونه پریښودل شول. برسیره پردې، د S. sclerotiorum سره د انتان ډاډ ترلاسه کولو لپاره، د لوبیا د بوټو ډډونه په ورته پراختیایي مرحله (10 ورځې) کې د تعقیم شوي سکالپل په کارولو سره په دوه مختلفو ځایونو کې پرې شول او د کولون کولو چوکر مخلوط شاوخوا 0.5 ګرامه په هر زخم کې ځای په ځای شو، وروسته د لوړ رطوبت سره په ټولو واکسین شوي بوټو کې د انتان او ناروغۍ پراختیا هڅول. د کنټرول بوټي په ورته ډول ټپیان شول او په مساوي اندازه (0.5 ګرامه) تعقیم شوي، غیر مستعمره شوي چوکر مخلوط په زخم کې ځای پر ځای شو او د لوړې رطوبت لاندې وساتل شو ترڅو د ناروغۍ پراختیا لپاره چاپیریال تقلید کړي او د درملنې ډلو ترمنځ ثبات ډاډمن کړي.
د درملنې طریقه: د لوبیا تخمونه د خاورې د خړوبولو له لارې د L-ornithine (250 mg/l) یا فنګس وژونکي Rizolex-T (50 mg/l) د 500 ملی لیتر اوبو محلول سره اوبه شوي، بیا درملنه د 10 ورځو په وقفه کې درې ځله تکرار شوې. د پلیسبو درملنې کنټرولونه د 500 ملی لیتر تعقیم شوي تقطیر شوي اوبو سره اوبه شوي. ټولې درملنې د شنو خونو شرایطو لاندې ترسره شوې (25 ± 2 ° C، 75 ± 1٪ نسبي رطوبت، او د 8 ساعتونو رڼا / 16 ساعتونو تیاره فوتوپیریډ). ټولو لوښو ته هره اونۍ اوبه ورکول کیدې او د متوازن NPK سرې (20-20-20، د 3.6٪ سلفر او TE مایکرو عناصرو سره؛ زین سیډز، مصر) سره د 3-4 g/l غلظت سره د پاڼو سپری کولو سره د ځانګړي ډول او د جوړونکي لارښوونو سره سم درملنه وشوه. پرته لدې چې بل ډول وویل شي، په بشپړه توګه پراخ شوي پاخه پاڼې (له پورته څخه دوهم او دریم پاڼې) د هر بیولوژیکي نقل څخه د درملنې وروسته په 72 ساعتونو کې (hpt) راټول شوي، همجنس شوي، راټول شوي او په -80 °C کې د نورو تحلیلونو لپاره زیرمه شوي، په شمول د اکسیډیټیو فشار شاخصونو هسټو کیمیکل ځایی کول، د لیپید پیرو اکسیډیشن، انزیماتیک او غیر انزیماتیک انټي اکسیډنټس او جین څرګندونه.
د سپینې فنګس انتان شدت د پیټزولډټ او ډیکسن پیمانه (۱۹۹۶) پر بنسټ د واکسین کولو وروسته د ۲۱ ورځو (dpi) په اونۍ کې ارزول شوی و چې د تیران او نورو لخوا تعدیل شوی و. (۲۰۰۶). په لنډه توګه، د لوبیا بوټو ډډونه او څانګې د انوکولیشن له نقطې څخه پیل شوي ترڅو د انټرنوډونو او نوډونو په اوږدو کې د زخمونو پرمختګ تعقیب کړي. بیا د انوکولیشن له نقطې څخه د ډډ یا څانګې په اوږدو کې تر ټولو لرې نقطې پورې د زخم فاصله اندازه شوه او د زخم موقعیت پراساس د ۱-۹ نمره وټاکل شوه، چیرې چې (۱) د انوکولیشن نقطې ته نږدې هیڅ څرګند انتان نه و په ګوته کړی او (۲-۹) د نوډونو/انټرنوډونو په اوږدو کې د زخم اندازې او پرمختګ کې تدریجي زیاتوالی په ګوته کوي (ضمیمه جدول S2). د سپینې فنګس انتان شدت بیا د فورمول ۲ په کارولو سره سلنه ته بدل شو:
سربیره پردې، د ناروغۍ د پرمختګ منحني (AUDPC) لاندې ساحه د فورمول (Shaner and Finney, 1977) په کارولو سره محاسبه شوه، کوم چې پدې وروستیو کې د عام لوبیا د سپینې خرابۍ لپاره تطبیق شوی (Chauhan et al., 2020) د مساوات 3 په کارولو سره:
چیرې چې Yi = د ناروغۍ شدت په وخت ti، Yi+1 = د ناروغۍ شدت په بل وخت ti+1، ti = د لومړۍ اندازه کولو وخت (په ورځو کې)، ti+1 = د بلې اندازه کولو وخت (په ورځو کې)، n = د وخت نقطو یا مشاهدې نقطو ټول شمیر. د لوبیا د نبات د ودې پیرامیټرونه په شمول د نبات لوړوالی (سانتي متره)، د هر نبات د څانګو شمیر، او د هر نبات د پاڼو شمیر په ټولو بیولوژیکي نقلونو کې د 21 ورځو لپاره په اونۍ کې ثبت شوي.
په هر بیولوژیکي نقل کې، د پاڼو نمونې (دوهم او دریم بشپړ وده شوي پاڼې له پورته څخه) د درملنې وروسته په 45 ورځ (د وروستي درملنې څخه 15 ورځې وروسته) راټولې شوې. هر بیولوژیکي نقل پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات) درلودل. د مات شوي نسج شاوخوا 500 ملی ګرامه د فوتوسنتیک رنګونو (کلوروفیل a، کلوروفیل b او کیروټینایډونو) استخراج لپاره د 80٪ اسیټون په کارولو سره په تیاره کې په 4 °C کې کارول شوي. د 24 ساعتونو وروسته، نمونې سینټرفیوج شوې او سوپرنټینټ د کلوروفیل a، کلوروفیل b او کیروټینایډ مینځپانګو د ټاکلو لپاره د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره د (لیچټینتهلر، 1987) میتود سره سم د دریو مختلفو طول موجونو (A470، A646 او A663 nm) کې د جذب اندازه کولو سره راټولې شوې. په پای کې، د فوتوسنتیک رنګونو مینځپانګه د لاندې فورمولونو 4-6 په کارولو سره محاسبه شوه چې د لیچټینتهلر (1987) لخوا تشریح شوي.
د درملنې وروسته په ۷۲ ساعتونو کې (hpt)، پاڼې (له پورته څخه دوهم او دریم بشپړ وده شوي پاڼې) د هایدروجن پیرو اکسایډ (H2O2) او سوپر آکسایډ انیون (O2•−) د هسټو کیمیکل ځایی کولو لپاره د هر بیولوژیکي نقل څخه راټولې شوې. هر بیولوژیکي نقل پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات) درلودل. هر بیولوژیکي نقل په نقل کې تحلیل شو (دوه تخنیکي نقلونه) ترڅو د میتود دقت، اعتبار او تکثیر ډاډمن شي. H2O2 او O2•− په ترتیب سره د 0.1٪ 3,3′-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) یا نایټرو بلو ټیټرازولیم (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany) په کارولو سره ټاکل شوي، د رومیرو-پورټاس او نورو (2004) او آدم او نورو (1989) لخوا تشریح شوي میتودونو تعقیبولو سره. د H2O2 د هسټو کیمیکل ځایی کولو لپاره، پاڼې د 0.1٪ DAB سره په 10 mM Tris بفر (pH 7.8) کې ویکیوم انفیلټریټ شوې او بیا د خونې په تودوخه کې د 60 دقیقو لپاره په رڼا کې اچول شوې. پاڼې د 0.15٪ (v/v) TCA کې په 4:1 (v/v) ایتانول: کلوروفارم (ال ګوموریا درمل جوړونې او طبي تجهیزات، قاهره، مصر) کې بلیچ شوې او بیا تر هغه وخته پورې رڼا ته ښکاره شوې چې تیاره شي. په ورته ډول، والوز د 10 mM پوټاشیم فاسفیټ بفر (pH 7.8) سره ویکیوم انفیلټریټ شوې چې 0.1 w/v % HBT لري ترڅو د O2•− هسټو کیمیکل ځایی کولو لپاره په موقعیت کې. پاڼې د 20 دقیقو لپاره د خونې په تودوخه کې په رڼا کې انفیلټریټ شوې، بیا د پورته په څیر بلیچ شوې، او بیا تر هغه وخته پورې روښانه شوې چې تیاره نیلي / بنفشي ځایونه څرګند شي. د پایله لرونکي نسواري (د H2O2 شاخص په توګه) یا نیلي-بنفشي (د O2•− شاخص په توګه) رنګ شدت د عکس پروسس کولو کڅوړې ImageJ (http://fiji.sc; لاسرسی د مارچ په 7، 2024) د فیجي نسخې په کارولو سره ارزول شوی.
مالونډیالډیهایډ (MDA؛ د لیپید پیرو اکسیډیشن نښه کونکي په توګه) د Du او Bramlage (1992) میتود سره سم د لږ بدلونونو سره ټاکل شوی و. د هر بیولوژیکي نقل څخه پاڼې (له پورته څخه دوهم او دریم بشپړ پرمختللي پاڼې) د درملنې وروسته 72 ساعته وروسته راټول شوي (hpt). په هر بیولوژیکي نقل کې پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات) شامل وو. هر بیولوژیکي نقل په نقل کې تحلیل شوی (دوه تخنیکي نقلونه) ترڅو د میتود دقت، اعتبار او تکثیر ډاډمن شي. په لنډه توګه، د MDA استخراج لپاره د 20٪ ټرایکلورواسیټیک اسید (TCA؛ ملی پور سیګما، برلینګټن، MA، USA) سره د 0.01٪ بټیلیټ هایدروکسیټولین (BHT؛ سیګما-الډریچ، سینټ لوئس، MO، USA) سره 0.5 ګرامه د ځمکې د پاڼو نسج کارول شوی و. بیا په سوپرناټینټ کې د MDA مینځپانګه د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره د 532 او 600 nm جذب اندازه کولو سره د رنګ میټریک له مخې ټاکل شوې او بیا د nmol g−1 FW په توګه څرګند شوې.
د غیر انزایمیک او انزایمیک انټي اکسیډنټونو د ارزونې لپاره، پاڼې (له پورته څخه دوهم او دریم بشپړ وده شوي پاڼې) د درملنې وروسته په 72 ساعتونو کې د هر بیولوژیکي نقل څخه راټولې شوې (hpt). هر بیولوژیکي نقل پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات) درلود. هر بیولوژیکي نمونه په نقل کې تحلیل شوه (دوه تخنیکي نمونې). دوه پاڼې د مایع نایتروجن سره مینځل شوې او په مستقیم ډول د انزایمیک او غیر انزایمیک انټي اکسیډنټونو، ټول امینو اسیدونو، پرولین مینځپانګې، جین څرګندونه، او د اکسیلیټ مقدار ټاکلو لپاره کارول شوې.
ټول محلول شوي فینولونه د فولین-سیوکالټیو ریجنټ (سیګما-الډریچ، سینټ لوئس، MO، USA) په کارولو سره ټاکل شوي چې د کاهکونین او نورو (1999) لخوا تشریح شوي میتود کې لږ بدلونونه راغلي. په لنډه توګه، نږدې 0.1 ګرامه همجنس شوي پاڼې نسج د 20 ملی لیتر 80٪ میتانول سره په تیاره کې د 24 ساعتونو لپاره استخراج شو او سوپرنټینټ د سنټرفیوګیشن وروسته راټول شو. د نمونې استخراج 0.1 ملی لیتر د 0.5 ملی لیتر فولین-سیوکالټیو ریجنټ (10٪) سره مخلوط شو، د 30 ثانیو لپاره وخوځول شو او د 5 دقیقو لپاره په تیاره کې پریښودل شو. بیا د 0.5 ملی لیتر 20٪ سوډیم کاربونیټ محلول (Na2CO3؛ د ال ګوموریه درمل جوړونې او طبي اکمالاتو شرکت، قاهره، مصر) په هر ټیوب کې اضافه شو، په بشپړه توګه مخلوط شو او د خونې په حرارت کې د 1 ساعت لپاره په تیاره کې انکیوبیټ شو. د انکیوبیشن وروسته، د تعامل مخلوط جذب د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره په 765 nm اندازه شو. د نمونې استخراج کې د ټول محلول شوي فینولونو غلظت د ګیلیک اسید کیلیبریشن منحني (فشر ساینسي، هیمپټن، NH، USA) په کارولو سره ټاکل شوی او د هر ګرام تازه وزن (mg GAE g-1 تازه وزن) د ګیلیک اسید معادل ملی ګرام په توګه څرګند شوی.
د فلاوونایډ ټول محلول مواد د جیریډین او نورو (2006) د طریقې سره سم د لږو بدلونونو سره ټاکل شوي. په لنډه توګه، د پورته میتانول استخراج 0.3 ملی لیتر د 0.3 ملی لیتر 5٪ المونیم کلورایډ محلول (AlCl3؛ فشر ساینسي، هیمپټن، NH، USA) سره مخلوط شو، په کلکه سره مخلوط شو او بیا د خونې په تودوخه کې د 5 دقیقو لپاره انکیوب شو، وروسته د 0.3 ملی لیتر 10٪ پوټاشیم اسټیټ محلول (ال ګوموریه درمل جوړونې او طبي تجهیزات، قاهره، مصر) اضافه شو، په بشپړه توګه مخلوط شو او د خونې په تودوخه کې د 30 دقیقو لپاره په تیاره کې انکیوب شو. د انکیوبیشن وروسته، د تعامل مخلوط جذب د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره په 430 nm کې اندازه شو. د نمونې استخراج کې د ټول محلول فلاوونایډونو غلظت د روټین کیلیبریشن منحني (TCI امریکا، پورټلینډ، OR، USA) په کارولو سره ټاکل شوی او بیا د تازه وزن په هر ګرام (mg RE g-1 تازه وزن) کې د ملی ګرام روټین مساوي په توګه څرګند شو.
د لوبیا پاڼو ټول وړیا امینو اسید مینځپانګه د یوکویاما او هیراماتسو (2003) لخوا وړاندیز شوي میتود پراساس د ترمیم شوي نین هایډرین ریجنټ (ترمو ساینسي کیمیکلز، والټم، ایم اے، امریکا) په کارولو سره ټاکل شوې او د سن او نورو لخوا تعدیل شوې. (2006). په لنډه توګه، د ځمکې 0.1 ګرامه نسج د pH 5.4 بفر سره استخراج شو، او د سپرنټینټ 200 μL د 200 μL نین هایډرین (2٪) او 200 μL پیریډین (10٪؛ سپیکٹرم کیمیکل، نیو برونزویک، نیو جرسي، امریکا) سره تعامل شو، د 30 دقیقو لپاره د جوش اوبو حمام کې اچول شوی، بیا سړه شوی او د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره په 580 nm کې اندازه شوی. له بلې خوا، پرولین د بیټس میتود (بیټس او نورو، 1973) لخوا ټاکل شوی. پرولین د 3٪ سلفوسالیسیلیک اسید (ترمو ساینسي کیمیکلز، والټم، ایم اے، امریکا) سره استخراج شو او د سنټرفیوګیشن وروسته، د سپرناټینټ 0.5 ملی لیتر د 1 ملی لیتر ګلیشیل اسیتیک اسید (فشر ساینسي، هیمپټن، NH، امریکا) او نان هایډرین ریجنټ سره مخلوط شو، د 45 دقیقو لپاره په 90 درجو سانتی ګراد کې انکیوبیټ شو، یخ شو او د پورته ورته سپیکٹروفوټومیټر په کارولو سره په 520 nm کې اندازه شو. د پاڼو په استخراج کې ټول وړیا امینو اسیدونه او پرولین په ترتیب سره د ګلیسین او پرولین کیلیبریشن منحنی (سیګما-الډریچ، سینټ لوئس، MO، امریکا) په کارولو سره ټاکل شوي، او د mg/g تازه وزن په توګه څرګند شوي.
د انټي اکسیډنټ انزایمونو د انزایمیک فعالیت د ټاکلو لپاره، نږدې 500 ملی ګرامه همجنسي نسج د 3 ملی لیتر 50 ملی میتر ټریس بفر (pH 7.8) سره استخراج شو چې پکې 1 ملی میتر EDTA-Na2 (سیګما-الډریچ، سینټ لوئس، MO، USA) او 7.5٪ پولی وینیلپیرولایډون (PVP؛ سیګما-الډریچ، سینټ لوئس، MO، USA) شامل وو، د یخچال لاندې د 20 دقیقو لپاره په 10,000 × g کې سینټرفیوج شو (4 °C)، او سوپرنټینټ (خام انزایم استخراج) راټول شو (ال-نګار او نور، 2023؛ عثمان او نور، 2023). بیا Catalase (CAT) د 0.1 M سوډیم فاسفیټ بفر 2 ملی لیتر (pH 6.5؛ Sigma-Aldrich، St. Louis، MO، USA) او د 269 mM H2O2 محلول 100 μl سره تعامل شو ترڅو د Aebi (1984) میتود سره سم د هغې انزایمیک فعالیت د لږ بدلونونو سره معلوم کړي (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023). د Guaiacol پورې تړلې پیرو اکسیډیز (POX) انزایمیک فعالیت د Harrach et al. (2009) میتود په کارولو سره ټاکل شوی. (۲۰۰۸) د کوچنیو تعدیلاتو سره (ال-نګار او نور، ۲۰۲۳؛ عثمان او نور، ۲۰۲۳) او د پولیفینول اکسیډیز (PPO) انزایمیک فعالیت د ۱۰۰ ملی متر سوډیم فاسفیټ بفر (pH ۶.۰)، ۱۰۰ μl ګویاکول (TCI کیمیاوي مواد، پورټلینډ، OR، USA) او ۱۰۰ μl ۱۲ ملی متر H2O2 سره د تعامل وروسته ټاکل شوی و. دا طریقه د (ال-نګار او نور، ۲۰۲۳؛ عثمان او نور، ۲۰۲۳) څخه یو څه تعدیل شوې وه. دا ارزونه د ۳ ملی لیتر کیټیکول محلول (ترمو ساینسي کیمیکلز، والټم، MA، USA) (۰.۰۱ M) سره د تعامل وروسته ترسره شوه چې په ۰.۱ ملی متر فاسفیټ بفر (pH ۶.۰) کې تازه چمتو شوی و. د CAT فعالیت د H2O2 د تجزیې په 240 nm (A240) کې د څارنې له لارې اندازه شو، د POX فعالیت د 436 nm (A436) کې د جذب زیاتوالي په څارنې سره اندازه شو، او د PPO فعالیت د UV-160A سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو، جاپان) په کارولو سره د 3 دقیقو لپاره په هرو 30 ثانیو کې د 495 nm (A495) کې د جذب بدلونونو ثبتولو له لارې اندازه شو.
د ریښتیني وخت RT-PCR د دریو انټي اکسیډنټ پورې اړوند جینونو د ټرانسکرپټ کچې کشف کولو لپاره کارول شوی و، پشمول د پیروکسیسومل کیټالیز (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1)، سوپر اکسایډ ډیسموټیس (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1)، او ګلوټاتیون ریډکټیس (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1)، د لوبیا پاڼو کې (له پورته څخه دوهم او دریم بشپړ وده شوي پاڼې) د وروستي درملنې څخه 72 ساعته وروسته. په لنډه توګه، RNA د جوړونکي پروتوکول سره سم د سمپلي P ټول RNA استخراج کټ (Cat. No. BSC52S1; BioFlux، Biori Technology، China) په کارولو سره جلا شو. بیا، cDNA د جوړونکي لارښوونو سره سم د TOP سکریپټ ™ cDNA ترکیب کټ په کارولو سره ترکیب شو. د پورته دریو جینونو لومړني ترتیبونه په ضمیمه جدول S3 کې لیست شوي دي. PvActin-3 (GenBank د لاسرسي شمیره: XM_068616709.1) د کور ساتنې جین په توګه کارول شوی و او د جین نسبي څرګندونه د 2-ΔΔCT میتود په کارولو سره محاسبه شوې وه (لیواک او شمیټګین، 2001). د بایوټیک فشار لاندې د ایکټین ثبات (د عامو ګل لرونکو نباتاتو او انتراکنوز فنګس کولیټوټریکم لینډیموتیانم ترمنځ نامناسب تعامل) او ابیوټیک فشار (وچکالي، مالګینتوب، ټیټ تودوخه) ښودل شوی و (بورګس او نور، 2012).
موږ په پیل کې د پروټین-پروټین BLAST وسیلې (BLASTp 2.15.0+) (Altschul et al., 1997, 2005) په کارولو سره په S. sclerotiorum کې د oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) پروټینونو جینوم پراخه په سیلیکو تحلیل ترسره کړ. په لنډه توګه، موږ د Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; GenBank accession number XP_040799428.1; 342 امینو اسیدونه) او Penicillium lagena (PlOAH; taxide: 94218; GenBank accession number XP_056833920.1; 316 امینو اسیدونه) څخه OAH د پوښتنې ترتیب په توګه د S. sclerotiorum (taxide: 5180) کې د همجنس پروټین نقشه کولو لپاره وکاروو. BLASTp د بایو ټیکنالوژۍ معلوماتو ملي مرکز (NCBI) ویب پاڼه، http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ کې په جین بانک کې د وروستي موجود S. sclerotiorum جینوم ډیټا په وړاندې ترسره شو.
سربیره پردې، د S. sclerotiorum (SsOAH) څخه وړاندوینه شوی OAH جین او د A. fijiensis CBS 313.89 او P. lagena څخه د AfOAH ارتقايي تحلیل او فایلوجینیټیک ونې د MEGA11 (Tamura et al., 2021) او JTT میټریکس پر بنسټ ماډل (Jones et al., 1992) کې د اعظمي احتمال میتود په کارولو سره استنباط شوي. د فایلوجینیټیک ونې د S. sclerotiorum څخه د ټولو وړاندوینې شوي OAH جینونو (SsOAH) د پروټین ترتیبونو د څو اړخیز سمون تحلیل او د محدودیت پر بنسټ د سمون وسیلې (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos and Agarwala, 2007) په کارولو سره د پوښتنې ترتیب سره یوځای شوی و. برسېره پردې، د S. sclerotiorum څخه د SsOAH غوره مطابقت لرونکي امینو اسید ترتیبونه د ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) په کارولو سره د پوښتنې ترتیبونو (AfOAH او PlOAH) (Larkin et al., 2007) سره سمون درلود، او په سمون کې ساتل شوي سیمې د ESPript وسیلې (نسخه 3.0؛ https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php) په کارولو سره لیدل شوي.
سربیره پردې، د S. sclerotiorum SsOAH وړاندوینې شوي فعال استازي ډومینونه او ساتل شوي سایټونه د InterPro وسیلې (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) (بلوم او نور، 2021) په کارولو سره په متقابل ډول په مختلفو کورنیو کې طبقه بندي شوي. په پای کې، د وړاندوینې شوي S. sclerotiorum SsOAH درې اړخیزه (3D) جوړښت ماډلینګ د پروټین هومولوژي/انالوژی پیژندنې انجن (Phyre2 سرور نسخه 2.0؛ http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (کیلي او نور، 2015) په کارولو سره ترسره شو او د SWISS-MODEL سرور (https://swissmodel.expasy.org/) (Biasini او نور، 2014) په کارولو سره تایید شو. وړاندوینه شوي درې بعدي جوړښتونه (PDB بڼه) د UCSF-Chimera پیکج (نسخه 1.15؛ https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/) (Pettersen et al., 2004) په کارولو سره په متقابل ډول لیدل شوي.
د سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم په مایسیلیا کې د آکسالواسیټیټ اسیتیل هایدرولیس (SsOAH؛ GenBank د لاسرسي شمیره: XM_001590428.1) د ټرانسکرپشنل کچې ټاکلو لپاره د مقداري ریښتیني وخت فلوروسینس PCR کارول شوی و. په لنډه توګه، S. سکلیروټیوریوم د PDB لرونکي فلاسک کې واکسین شو او په یوه ټکان ورکوونکي انکیوبیټر (ماډل: I2400، نیو برونزویک ساینسي شرکت، اډیسن، NJ، USA) کې د 24 ساعتونو لپاره په 150 rpm کې او په دوامداره تیاره کې (24 ساعته) کې ځای په ځای شو ترڅو د مایسیلیا وده هڅوي. له هغې وروسته، حجرو ته د L-ornithine او فنګس وژونکي Rizolex-T سره د وروستي IC50 غلظت (تقریبا 40 او 3.2 mg/L، په ترتیب سره) درملنه وشوه او بیا د ورته شرایطو لاندې د نورو 24 ساعتونو لپاره کرل شو. د انکیوبیشن وروسته، کلتورونه د 5 دقیقو لپاره په 2500 rpm کې سینټرفیوج شول او سوپرناټینټ (فنګسي مایسیلیم) د جین د څرګندولو تحلیل لپاره راټول شو. په ورته ډول، فنګسي مایسیلیم د 0، 24، 48، 72، 96، او 120 ساعتونو کې د انتان وروسته د اخته نباتاتو څخه راټول شو چې د اخته نسجونو په سطحه یې سپین فنګس او کاټني مایسیلیم جوړ کړی و. RNA د فنګسي مایسیلیم څخه استخراج شو او بیا cDNA ترکیب شو لکه څنګه چې پورته تشریح شوی. د SsOAH لپاره د پرائمر ترتیبونه په ضمیمه جدول S3 کې لیست شوي دي. SsActin (GenBank د لاسرسي شمیره: XM_001589919.1) د کور ساتنې جین په توګه کارول شوی و، او د نسبي جین څرګندونه د 2-ΔΔΔCT میتود (Livak او Schmittgen، 2001) په کارولو سره محاسبه شوه.
اکسالیک اسید د کچالو ډیکسټروز شوربا (PDB) او د نباتاتو نمونو کې چې د فنګسي رنځجن سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم لري د Xu او Zhang (2000) میتود سره سم د لږ بدلونونو سره ټاکل شوی و. په لنډه توګه، د S. سکلیروټیوریوم ایزولیټونه د PDB لرونکي فلاسکونو کې واکسین شوي وو او بیا په یو لړزونکي انکیوبیټر (ماډل I2400، نیو برونزویک ساینسي شرکت، اډیسن، NJ، USA) کې په 150 rpm کې په 25 ± 2 °C کې د 3-5 ورځو لپاره په دوامداره تیاره کې (24 ساعته) کرل شوي ترڅو د مایسیلیال وده هڅوي. د انکیوبیشن وروسته، فنګسي کلتور لومړی د واټمن #1 فلټر کاغذ له لارې فلټر شوی و او بیا د 5 دقیقو لپاره په 2500 rpm کې سینټرفیوج شوی و ترڅو پاتې مایسیلیوم لرې کړي. سوپرنټینټ د اکسالیټ د نور مقداري ټاکلو لپاره په 4°C کې راټول او زیرمه شوی و. د نبات نمونو چمتو کولو لپاره، نږدې 0.1 ګرامه د نبات نسج ټوټې درې ځله د اوبو سره استخراج شوي (هر ځل 2 ملی لیتر). بیا نمونې د 5 دقیقو لپاره په 2500 rpm کې سینټرفیوج شوې، سوپرنټینټ د واټمن نمبر 1 فلټر کاغذ له لارې وچ فلټر شوی او د نورو تحلیل لپاره راټول شوی.
د اکسالیک اسید د کمیتي تحلیل لپاره، د تعامل مخلوط په لاندې ترتیب کې په یوه شیشه بند شوي ټیوب کې چمتو شوی و: 0.2 ملی لیتره نمونه (یا د PDB کلچر فلټریټ یا اکسالیک اسید معیاري محلول)، 0.11 ملی لیتره بروموفینول نیلي (BPB، 1 mM؛ فشر کیمیکل، پیټسبورګ، PA، USA)، 0.198 ملی لیتره 1 M سلفوریک اسید (H2SO4؛ ال ګوموریه درمل جوړونې او طبي سامانونه، قاهره، مصر) او 0.176 ملی لیتره 100 mM پوټاشیم ډیکرومیټ (K2Cr2O7؛ TCI کیمیکلز، پورټلینډ، OR، USA)، او بیا محلول د 4.8 ملی لیتره پورې د تشو اوبو سره حل شو، په کلکه مخلوط شو او سمدلاسه د 60 °C اوبو حمام کې ځای په ځای شو. د 10 دقیقو وروسته، تعامل د 0.5 ملی لیتره سوډیم هایدروکسایډ محلول (NaOH؛ 0.75 M) اضافه کولو سره ودرول شو. د تعامل مخلوط جذب (A600) د UV-160 سپیکٹروفوټومیټر (شیمازو کارپوریشن، جاپان) په کارولو سره په 600 nm کې اندازه شو. PDB او تقطیر شوي اوبه په ترتیب سره د کلتور فلټریټونو او د نباتاتو نمونو د اندازې لپاره د کنټرول په توګه کارول شوي. په کلتور فلټریټونو کې د اکسالیک اسید غلظت، د PDB میډیم (μg.mL−1) په ملی لیتر کې د اکسالیک اسید مایکروګرام په توګه څرګند شوی، او د پاڼو په استخراج کې، د تازه وزن (μg.g−1 FW) په هر ګرام کې د اکسالیک اسید مایکروګرام په توګه څرګند شوی، د اکسالیک اسید کیلیبریشن منحني (ترمو فشر ساینسي کیمیکلز، والټم، MA، USA) په کارولو سره ټاکل شوی.
د مطالعې په اوږدو کې، ټولې تجربې په بشپړ ډول په تصادفي ډیزاین (CRD) کې ډیزاین شوې وې چې په هر درملنه کې شپږ بیولوژیکي نقلونه او په هر بیولوژیکي نقل کې پنځه لوښي (په هر لوښي کې دوه نباتات) پرته لدې چې بل ډول وویل شي. بیولوژیکي نقلونه په نقل کې تحلیل شوي (دوه تخنیکي نقلونه). تخنیکي نقلونه د ورته تجربې د تکثیر وړتیا چک کولو لپاره کارول شوي مګر په احصایوي تحلیل کې د جعلي نقلونو مخنیوي لپاره نه کارول شوي. معلومات په احصایوي ډول د تغیر تحلیل (ANOVA) په کارولو سره تحلیل شوي چې وروسته د توکی-کریمر په صادقانه توګه د پام وړ توپیر (HSD) ازموینه (p ≤ 0.05) تعقیب شوې. د ان ویټرو تجربو لپاره، د IC50 او IC99 ارزښتونه د پروبیټ ماډل په کارولو سره محاسبه شوي او د 95٪ باور وقفې محاسبه شوي.
په ټولیزه توګه څلور جلا شوي توکي د مصر د الغابیه ولایت د سویابین له مختلفو کروندو څخه راټول شوي وو. په PDA میډیم کې، ټولو جلا شوي موادو کریمي سپین مایسیلیم تولید کړ چې په چټکۍ سره کاټن سپین شو (شکل 1A) او بیا د سکلیروټیم په مرحله کې خړ یا نسواري. سکلیروټیا معمولا ګڼ، تور، کروی یا غیر منظم شکل لري، له 5.2 څخه تر 7.7 ملي میتر پورې اوږد او له 3.4 څخه تر 5.3 ملي میتر پورې قطر لري (شکل 1B). که څه هم څلورو جلا شوي موادو د 25 ± 2 °C (شکل 1A) کې د 10-12 ورځو انکیوبیشن وروسته د کلتوري موادو په څنډه کې د سکلیروټیا یوه حاشیه بڼه رامینځته کړه، د هر پلیټ د سکلیروټیا شمیر د دوی په مینځ کې د پام وړ توپیر درلود (P < 0.001)، د جلا شوي موادو 3 سره د سکلیروټیا ترټولو لوړه شمیره درلوده (په هر پلیټ کې 32.33 ± 1.53 سکلیروټیا؛ شکل 1C). په ورته ډول، ایزولیټ #3 په PDB کې د نورو ایزولیټونو په پرتله ډیر اکسالیک اسید تولید کړ (3.33 ± 0.49 μg.mL−1؛ شکل 1D). ایزولیټ #3 د فایټوپیتوجینک فنګس سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم ځانګړي مورفولوژیکي او مایکروسکوپي ځانګړتیاوې ښودلې. د مثال په توګه، په PDA کې، د ایزولیټ #3 کالونۍ په چټکۍ سره وده وکړه، کریمي سپینې وې (شکل 1A)، برعکس خاکستري یا سپک سالمن ژیړ نسواري، او د 25 ± 2°C په تودوخه کې 6-7 ورځې ته اړتیا درلوده ترڅو د 9 سانتي مترو قطر پلیټ سطح په بشپړ ډول پوښ کړي. د پورته مورفولوژیکي او مایکروسکوپي ځانګړتیاو پراساس، ایزولیټ #3 د سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم په توګه پیژندل شوی.
شکل ۱. د عامو دانه لرونکو فصلونو څخه د S. sclerotiorum isolates ځانګړتیاوې او رنځپوهنه. (A) د PDA په منځ کې د څلورو S. sclerotiorum isolates د مایسیلیال وده، (B) د څلورو S. sclerotiorum isolates sclerotia، (C) د سکلیروټیا شمیر (په هر پلیټ کې)، (D) د PDB په منځ کې د اکسالیک اسید سرایت (μg.mL−1)، او (E) د شنو خونو شرایطو لاندې د حساس سوداګریزو دانه لرونکو کښت ګیزا 3 کې د څلورو S. sclerotiorum isolates د ناروغۍ شدت (%). ارزښتونه د پنځو بیولوژیکي نقلونو اوسط ± SD استازیتوب کوي (n = 5). مختلف لیکونه د درملنې ترمنځ د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي (p < 0.05). (F–H) د سپینې مولډ نښې نښانې په ترتیب سره د ځمکې په پورته ډډونو او سلیکونو کې څرګندې شوې، د جلا #3 (dpi) سره د واکسین کولو وروسته 10 ورځې وروسته. (I) د S. sclerotiorum isolate #3 د داخلي لیکل شوي فاصله کونکي (ITS) سیمې ارتقايي تحلیل د اعظمي احتمال میتود په کارولو سره ترسره شو او د بایو ټیکنالوژۍ معلوماتو ملي مرکز (NCBI) ډیټابیس (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) څخه ترلاسه شوي 20 حوالې جلا کونکو / فشارونو سره پرتله شو. د کلسترینګ لینونو پورته شمیرې د سیمې پوښښ (%) په ګوته کوي، او د کلسترینګ لینونو لاندې شمیرې د څانګې اوږدوالی په ګوته کوي.
سربیره پردې، د ناروغۍ د تایید لپاره، څلور ترلاسه شوي S. sclerotiorum جلا کوونکي د شنو خونو شرایطو لاندې د حساس سوداګریز لوبیا کښت ګیزا 3 د واکسین کولو لپاره کارول شوي، کوم چې د کوچ د پوسټولیټونو سره مطابقت لري (شکل 1E). که څه هم ټول ترلاسه شوي فنګسي جلا کوونکي رنځجنیک وو او کولی شي شنه لوبیا اخته کړي (cv. Giza 3)، چې د ځمکې په ټولو پورته برخو (شکل 1F) کې د سپینې فنګس نښې نښانې رامینځته کوي، په ځانګړې توګه په ډډونو (شکل 1G) او پوډونو (شکل 1H) کې د واکسین کولو وروسته 10 ورځې (dpi)، جلا کوونکي 3 په دوو خپلواکو تجربو کې ترټولو تیریدونکي جلا کوونکي وو. جلا کوونکي 3 د لوبیا په بوټو کې د ناروغۍ ترټولو لوړ شدت (٪) درلود (24.0 ± 4.0، 58.0 ± 2.0، او 76.7 ± 3.1 په ترتیب سره د 7، 14، او 21 ورځو وروسته د انفیکشن؛ شکل 1F).
د خورا برید کونکي S. sclerotiorum isolate #3 پیژندنه د داخلي لیکل شوي فاصله کونکي (ITS) ترتیب (شکل 1I) پراساس نور هم تایید شوه. د isolate #3 او 20 حوالې isolates/strains ترمنځ د فیلوجینټیک تحلیل د دوی ترمنځ لوړ ورته والی (>99%) ښودلی. دا د یادونې وړ ده چې د S. sclerotiorum isolate #3 (533 bp) د وچ نخود تخمونو څخه جلا شوي امریکایی S. sclerotiorum isolate LPM36 (GenBank accession number MK896659.1; 540 bp) او د چینایي S. sclerotiorum isolate YKY211 (GenBank accession number OR206374.1; 548 bp) سره لوړ ورته والی لري، کوم چې د وایلټ (Matthiola incana) د ډډ خرابیدو لامل کیږي، چې ټول یې د ډینډروګرام په سر کې په جلا توګه ګروپ شوي دي (شکل 1I). دا نوی ترتیب د NCBI ډیټابیس کې زیرمه شوی او د "Sclerotinia sclerotiorum – isolate YN-25" (GenBank accession number PV202792) په نوم نومول شوی. دا لیدل کیدی شي چې isolate 3 ترټولو برید کوونکی isolate دی؛ له همدې امله، دا isolate په ټولو راتلونکو تجربو کې د مطالعې لپاره غوره شوی و.
د ډایمین L-ornithine (Sigma-Aldrich، Darmstadt، جرمني) د باکتریا ضد فعالیت په مختلفو غلظتونو (12.5، 25، 50، 75، 100 او 125 mg/L) کې د S. sclerotiorum isolate 3 په وړاندې په ویټرو کې وڅیړل شو. دا د یادونې وړ ده چې L-ornithine یو باکتریا ضد اغیز درلود او په تدریجي ډول یې د S. sclerotiorum hyphae د شعاعي ودې مخه ونیوله په دوز پورې تړلې طریقه (شکل 2A، B). په لوړ غلظت ازمول شوي (125 mg/L) کې، L-ornithine د مایسیلیال ودې د مخنیوي ترټولو لوړه کچه (99.62 ± 0.27٪؛ شکل 2B) ښودلې، کوم چې د سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T سره مساوي وه (د مخنیوي کچه 99.45 ± 0.39٪؛ شکل 2C) په لوړ غلظت ازمول شوي (10 mg/L) کې، ورته اغیزمنتوب ښیې.
شکل ۲. د سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم په وړاندې د L-ornithine د انټي باکتریا ضد فعالیت. (الف) د S. sclerotiorum په وړاندې د L-ornithine د مختلفو غلظتونو د انټي باکتریا ضد فعالیت پرتله کول د سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T (10 mg/L) سره. (B, C) د S. sclerotiorum mycelial ودې د مخنیوي کچه (%) د L-ornithine (12.5, 25, 50, 75, 100 او 125 mg/L) یا Rizolex-T (2, 4, 6, 8 او 10 mg/L) په ترتیب سره د مختلف غلظتونو سره د درملنې وروسته. ارزښتونه د پنځو بیولوژیکي نقلونو اوسط ± SD استازیتوب کوي (n = 5). مختلف لیکونه د درملنې ترمنځ احصایوي توپیرونه په ګوته کوي (p < 0.05). (D, E) په ترتیب سره د L-ornithine او سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T د پروبیټ ماډل ریګریشن تحلیل. د پروبیټ ماډل ریګریشن لاین د یوې قوي نیلي کرښې په توګه ښودل شوی، او د باور وقفه (95٪) د یوې ټوټې شوې سره کرښې په توګه ښودل شوې.
برسېره پردې، د پروبیټ ریګریشن تحلیل ترسره شو او اړونده پلاټونه په جدول 1 او شکل 2D,E کې ښودل شوي دي. په لنډه توګه، د L-ornithine د منلو وړ سلپ ارزښت (y = 2.92x − 4.67) او اړوند د پام وړ احصایې (Cox & Snell R2 = 0.3709، Nagelkerke R2 = 0.4998 او p < 0.0001؛ شکل 2D) د سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T (y = 1.96x − 0.99، Cox & Snell R2 = 0.1242، Nagelkerke R2 = 0.1708 او p < 0.0001) (جدول 1) په پرتله د S. sclerotiorum په وړاندې د فنګس ضد فعالیت زیات شوی ښودلی.
جدول ۱. د S. sclerotiorum په وړاندې د L-ornithine او سوداګریز فنګس وژونکي "Rizolex-T" د نیم اعظمي مخنیوي غلظت (IC50) او IC99 (mg/l) ارزښتونه.
په ټولیز ډول، L-ornithine (250 mg/L) د درملنې شوي عام لوبیا بوټو کې د سپینې فنګس پراختیا او شدت د پام وړ کم کړ د هغو بوټو په پرتله چې درملنه یې نه وه شوې S. sclerotiorum- اخته شوي (کنټرول؛ شکل 3A). په لنډه توګه، که څه هم د درملنې نه شوې اخته کنټرول بوټو د ناروغۍ شدت په تدریجي ډول زیات شو (52.67 ± 1.53، 83.21 ± 2.61، او 92.33 ± 3.06٪)، L-ornithine د تجربې په اوږدو کې د ناروغۍ شدت (%) د پام وړ کم کړ (8.97 ± 0.15، 18.00 ± 1.00، او 26.36 ± 3.07) په ترتیب سره د درملنې وروسته په 7، 14، او 21 ورځو کې (dpt) (شکل 3A). په ورته ډول، کله چې د S. sclerotiorum اخته لوبیا بوټي د 250 mg/L L-ornithine سره درملنه شول، د ناروغۍ د پرمختګ منحني (AUDPC) لاندې ساحه د نه درملنې شوي کنټرول کې له 1274.33 ± 33.13 څخه 281.03 ± 7.95 ته راټیټه شوه، کوم چې د مثبت کنټرول 50 mg/L Rizolex-T فنګس وژونکي (183.61 ± 7.71؛ شکل 3B) څخه یو څه ټیټه وه. په دویمه تجربه کې ورته رجحان لیدل شوی.
شکل ۳. د شنو خونو په شرایطو کې د سکلیروټینیا سکلیروټیوریوم له امله د عام لوبیا د سپینې خرابۍ په پراختیا باندې د L-ornithine د خارجي استعمال اغیزه. (A) د 250 mg/L L-ornithine سره درملنې وروسته د عام لوبیا د سپینې فنګس د ناروغۍ پرمختګ منحنی. (B) د L-ornithine سره درملنې وروسته د عام لوبیا د سپینې فنګس د ناروغۍ پرمختګ منحنی (AUDPC) لاندې ساحه. ارزښتونه د پنځو بیولوژیکي نقلونو اوسط ± SD استازیتوب کوي (n = 5). مختلف لیکونه د درملنې ترمنځ د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي (p < 0.05).
د ۲۵۰ ملی ګرامه/لیتر L-ornithine بهرنۍ استعمال په تدریجي ډول د نبات لوړوالی (انځور ۴A)، د هر نبات د څانګو شمیر (انځور ۴B)، او د هر نبات د پاڼو شمیر (انځور ۴C) د ۴۲ ورځو وروسته زیات کړ. پداسې حال کې چې سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T (۵۰ ملی ګرامه/لیتر) د ټولو مطالعه شویو تغذیوي پیرامیټرو باندې ترټولو لوی اغیز درلود، د ۲۵۰ ملی ګرامه/لیتر L-ornithine بهرنۍ استعمال د غیر درملنې شوي کنټرولونو په پرتله دوهم لوی اغیز درلود (انځور ۴A-C). له بلې خوا، د L-ornithine درملنې د فوتوسنتیتیک رنګونو کلوروفیل a (انځور 4D) او کلوروفیل b (انځور 4E) په محتوا باندې د پام وړ اغیزه نه درلوده، مګر د منفي کنټرول (0.44 ± 0.02 mg/g fr wt) او مثبت کنټرول (0.46 ± 0.02 mg/g fr wt؛ انځور 4F) په پرتله د کارټینایډ ټول مینځپانګه (0.56 ± 0.03 mg/g fr wt) یو څه زیاته کړه. په ټولیز ډول، دا پایلې ښیي چې L-ornithine د درملنې شوي دانو لپاره فایټوټوکسیک ندي او ممکن حتی د دوی وده هڅوي.
شکل ۴. د شنو خونو په شرایطو کې د سکلیروټینیا سکلیروټیوریم سره اخته شوي د لوبیا پاڼو د ودې ځانګړتیاو او فوتوسنتیک رنګونو باندې د خارجي L-ornithine غوښتنلیک اغیزه. (A) د نبات لوړوالی (cm)، (B) د هر نبات د څانګو شمیر، (C) د هر نبات د پاڼو شمیر، (D) د کلوروفیل a مینځپانګه (mg g-1 fr wt)، (E) د کلوروفیل b مینځپانګه (mg g-1 fr wt)، (F) د کیروټینایډ ټول مینځپانګه (mg g-1 fr wt). ارزښتونه د پنځو بیولوژیکي نقلونو اوسط ± SD دي (n = 5). مختلف لیکونه د درملنې ترمنځ د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه ښیې (p < 0.05).
د غبرګون لرونکي اکسیجن ډولونو (ROS؛ د هایدروجن پیرو اکسایډ [H2O2] په توګه څرګند شوی) او آزاد رادیکالونو (د سوپر اکسایډ انیونونو په توګه څرګند شوی [O2•−]) په ځایي توګه د هسټو کیمیکل ځایی کول څرګنده کړه چې د L-ornithine (250 mg/L) بهرنۍ کارول د H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW؛ شکل 5A) او O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW؛ شکل 5B) راټولول د دواړو غیر درملنې شوي اخته نباتاتو (173.31 ± 12.06 او 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW، په ترتیب سره) او هغه نباتات چې د 50 mg/L سره د سوداګریز فنګس وژونکي Rizolex-T (170.12 ± 9.50 او 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt سره درملنه شوي، د راټولولو په پرتله د پام وړ کم کړي. په ترتیب سره) په 72 ساعتونو کې. د H2O2 او O2 لوړه کچه •− د hpt لاندې راټوله شوه (انځور 5A، B). په ورته ډول، د TCA پر بنسټ مالونډیالډیهایډ (MDA) ازموینې ښودلې چې د S. sclerotiorum اخته لوبیا بوټو په خپلو پاڼو کې د MDA لوړه کچه (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) راټوله کړه (انځور 5C). په هرصورت، د L-ornithine بهرنۍ تطبیق د لیپید پیرو اکسیډیشن د پام وړ کم کړ لکه څنګه چې په درملنه شوي بوټو کې د MDA مینځپانګې کمښت لخوا ثبوت شوی (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
شکل ۵. د شنو خونو په شرایطو کې د انتان څخه وروسته په ۷۲ ساعتونو کې د S. sclerotiorum سره اخته شوي د لوبیا پاڼو کې د اکسیډیټیو فشار او غیر انزایمیک انټي اکسیډنټ دفاعي میکانیزمونو د عمده نښو په اړه د بهرني L-ornithine غوښتنلیک اغیز. (A) هایدروجن پیرو اکسایډ (H2O2; nmol g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، (B) سوپر اکسایډ انیون (O2•−; nmol g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، (C) مالونډیالډیهایډ (MDA; nmol g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، (D) ټول محلول شوي فینولونه (mg GAE g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، (E) ټول محلول شوي فلاوونایډونه (mg RE g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، (F) ټول وړیا امینو اسیدونه (mg g−1 FW) په ۷۲ hpt کې، او (G) پرولین مینځپانګه (mg g−1 FW) په ۷۲ hpt کې. ارزښتونه د 5 بیولوژیکي نقلونو اوسط ± معیاري انحراف (اوسط ± SD) استازیتوب کوي (n = 5). مختلف لیکونه د درملنې ترمنځ د احصایوي پلوه د پام وړ توپیرونه په ګوته کوي (p < 0.05).