د Nature.com د لیدنې لپاره مننه. هغه براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ د CSS لپاره محدود ملاتړ لري. د غوره تجربې لپاره، موږ سپارښتنه کوو چې تاسو یو تازه شوی براوزر وکاروئ (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت بند کړئ). په ورته وخت کې، د دوامداره ملاتړ ډاډ ترلاسه کولو لپاره، موږ به سایټ پرته له سټایلونو او جاواسکریپټ څخه وښیو.
د انسولین نانو ذرات (NPs) چې د لوړ بار کولو مینځپانګې سره په مختلفو دوز بڼو کې مختلف غوښتنلیکونه موندلي دي. د دې کار موخه د انسولین بار شوي چیټوسان نانو ذرات جوړښت باندې د فریز وچولو او سپری وچولو پروسو اغیز ارزول دي، د مانیټول سره یا پرته د کریوپروټیکټینټ په توګه. موږ د دې نانو ذراتو کیفیت د دوی د بیا حل کولو له لارې هم ارزولی. د ډیهایډریشن څخه دمخه، د چیټوسان/سوډیم ټرایپولیفاسفیټ/انسولین کراس لینک شوي نانو ذراتو اندازه 318 nm ته غوره شوې وه، PDI 0.18 وه، د انکیپسولیشن موثریت 99.4٪ و، او بار کول 25.01٪ و. د بیا رغونې وروسته، ټول نانو ذرات، پرته له هغو چې د مانیټول کارولو پرته د فریز وچولو میتود لخوا تولید شوي، خپل کروی ذره جوړښت ساتلی. د مانیټول لرونکي نانو ذراتو په پرتله چې د سپری لخوا ډیهایډریټ شوي، د مانیټول څخه پاک سپری وچ شوي نانو ذرات هم د ورته انکیپسولیشن نرخ سره ترټولو کوچنی اوسط ذره اندازه (376 nm) او د بار کولو ترټولو لوړ مینځپانګه (25.02٪) ښودلې. (۹۸.۷٪) او PDI (۰.۲۰) د وچولو یا یخولو وچولو تخنیکونو له لارې. د مانیتول پرته د سپری وچولو له لارې وچ شوي نانو ذرات د انسولین ترټولو ګړندۍ خوشې کیدو او د حجرو جذب لوړ موثریت پایله هم لري. دا کار ښیې چې د سپری وچول کولی شي د دودیزو یخولو وچولو میتودونو په پرتله د کریوپروټیکټینټونو اړتیا پرته د انسولین نانو ذرات ډیهایډریټ کړي، د بارولو لوی ظرفیت رامینځته کوي، د اضافه کولو اړتیاوې کموي او عملیاتي لګښتونه د پام وړ ګټه لري.
په ۱۹۲۲ کال کې د خپل کشف راهیسې، انسولین او د هغې درمل جوړونکو د لومړي ډول شکر ناروغۍ (T1DM) او دوهم ډول شکر ناروغۍ (T1DM) ناروغانو ژوند ژغورلی دی. په هرصورت، د لوړ مالیکولر وزن پروټین په توګه د هغې د ځانګړتیاو له امله، انسولین په اسانۍ سره راټولیږي، د پروټولوټیک انزایمونو لخوا ماتیږي، او د لومړي پاس اغیزې لخوا له مینځه وړل کیږي. هغه خلک چې د لومړي ډول شکر ناروغۍ تشخیص شوي د خپل پاتې ژوند لپاره د انسولین انجیکشنونو ته اړتیا لري. ډیری ناروغان چې په پیل کې د دوهم ډول شکر ناروغۍ تشخیص شوي هم اوږدمهاله انسولین انجیکشنونو ته اړتیا لري. د انسولین ورځني انجیکشنونه د دې اشخاصو لپاره د ورځني درد او ناراحتۍ جدي سرچینه ده، چې په رواني روغتیا منفي اغیزې لري. په پایله کې، د انسولین ادارې نور ډولونه چې لږ ناراحتي رامینځته کوي، لکه د انسولین شفاهي اداره، په پراخه کچه مطالعه کیږي 5 ځکه چې دوی د نړۍ په کچه د شکر ناروغۍ سره د نږدې 5 ملیارد خلکو د ژوند کیفیت بیرته راګرځولو وړتیا لري.
د نانو ذراتو ټیکنالوژۍ د شفاهي انسولین اخیستلو په هڅو کې د پام وړ پرمختګ کړی دی 4,6,7. یو چې په مؤثره توګه د بدن ځانګړو ځایونو ته د هدفمند تحویل لپاره انسولین د تخریب څخه ساتي او ساتي. په هرصورت، د نانو ذراتو فورمولونو کارول ډیری محدودیتونه لري، په عمده توګه د ذراتو تعلیق د ثبات مسلو له امله. ځینې راټولیدل ممکن د ذخیره کولو پرمهال رامینځته شي، کوم چې د انسولین بار شوي نانو ذراتو بایو شتون کموي 8. سربیره پردې، د نانو ذراتو او انسولین د پولیمر میټریکس کیمیاوي ثبات هم باید په پام کې ونیول شي ترڅو د انسولین نانو ذراتو (NPs) ثبات ډاډمن شي. اوس مهال، د منجمد وچولو ټیکنالوژي د مستحکم NPs رامینځته کولو لپاره د سرو زرو معیار دی پداسې حال کې چې د ذخیره کولو پرمهال ناغوښتل شوي بدلونونو مخه نیسي 9.
په هرصورت، د یخ وچولو لپاره د کریوپروټیکټینټونو اضافه کولو ته اړتیا ده ترڅو د NPs کروی جوړښت د یخ کرسټالونو میخانیکي فشار څخه اغیزمن کیدو مخه ونیسي. دا د لیوفیلیزیشن وروسته د انسولین نانو پارټیکټونو بار کول د پام وړ کموي، ځکه چې کریوپروټیکټینټ د وزن تناسب ډیره برخه نیسي. له همدې امله، تولید شوي انسولین NPs ډیری وختونه د وچو پوډر فارمولونو جوړولو لپاره نامناسب موندل کیږي، لکه د شفاهي ټابلیټونو او شفاهي فلمونو، ځکه چې د انسولین د درملنې کړکۍ ترلاسه کولو لپاره د وچو نانو پارټیکټونو لوی مقدار ته اړتیا ده.
د سپری وچول د درملو صنعت کې د مایع مرحلو څخه د وچو پوډرو تولید لپاره یو مشهور او ارزانه صنعتي پیمانه پروسه ده 10,11. د ذراتو د جوړولو پروسې کنټرول د څو بایو فعال مرکباتو 12,13 مناسب انکیپسولیشن ته اجازه ورکوي. سربیره پردې، دا د شفاهي ادارې لپاره د انکیپسولیټ شوي پروټینونو چمتو کولو لپاره یو مؤثر تخنیک ګرځیدلی. د سپری وچولو پرمهال، اوبه ډیر ژر تبخیر کیږي، کوم چې د ذراتو د کور د تودوخې ټیټ ساتلو کې مرسته کوي 11,14، د دې غوښتنلیک ته اجازه ورکوي چې د تودوخې حساس اجزاو انکیپسولیټ کړي. د سپری وچولو دمخه، د پوښ کولو مواد باید د انکیپسولیټ شوي اجزاو لرونکي محلول سره په بشپړه توګه همغږي شي 11,14. د یخ وچولو برعکس، د سپری وچولو کې د انکیپسولیشن دمخه همغږي کول د ډیهایډریشن پرمهال د انکیپسولیشن موثریت ښه کوي. څرنګه چې د سپری وچولو انکیپسولیشن پروسه کریوپروټیکټینټونو ته اړتیا نلري، د سپری وچول د لوړ بار کولو مینځپانګې سره د وچو NPs تولید لپاره کارول کیدی شي.
دا څیړنه د آیون جیل میتود په کارولو سره د چیټوسان او سوډیم ټریپولی فاسفیټ د کراس لینک کولو له لارې د انسولین بار شوي NPs تولید راپور ورکوي. د آیون جیلیشن د چمتو کولو یوه طریقه ده چې د ځانګړو شرایطو لاندې د دوه یا ډیرو ایونیک ډولونو ترمنځ د الیکټروسټاټیک تعاملاتو له لارې د نانو ذرات تولید ته اجازه ورکوي. د فریز وچولو او سپری وچولو تخنیکونه دواړه د مطلوب چیټوسان/سوډیم ټریپولی فاسفیټ/انسولین کراس لینک شوي نانو ذرات ډیهایډریټ کولو لپاره کارول شوي. د ډیهایډریشن وروسته، د دوی مورفولوژي د SEM لخوا تحلیل شوه. د دوی د بیا ترکیب وړتیا د دوی د اندازې ویش، د سطحې چارج، PDI، د انکیپسولیشن موثریت، او بار کولو مینځپانګې اندازه کولو سره ارزول شوې. د ډیهایډریشن مختلفو میتودونو لخوا تولید شوي د حل شوي نانو ذراتو کیفیت هم د دوی د انسولین محافظت، خوشې کولو چلند، او د حجرو جذب موثریت پرتله کولو سره ارزول شوی.
د مخلوط محلول pH او د chitosan او انسولین تناسب دوه مهم عوامل دي چې د وروستي NPs د ذراتو اندازه او د انکیپسولیشن موثریت (EE) اغیزه کوي، ځکه چې دوی مستقیم د ionotropic gelation پروسې اغیزه کوي. د مخلوط محلول pH د ذراتو اندازې او انکیپسولیشن موثریت سره خورا تړاو لري ښودل شوی (شکل 1a). لکه څنګه چې په شکل 1a کې ښودل شوي، لکه څنګه چې pH له 4.0 څخه 6.0 ته لوړ شو، د اوسط ذراتو اندازه (nm) کمه شوه او EE د پام وړ لوړ شو، پداسې حال کې چې کله pH 6.5 ته لوړ شو، د اوسط ذراتو اندازه زیاتیدل پیل شول او EE بدل نه شو. لکه څنګه چې د chitosan او انسولین تناسب زیاتیږي، د اوسط ذراتو اندازه هم زیاتیږي. سربیره پردې، په EE کې هیڅ بدلون نه دی لیدل شوی کله چې نانو ذرات د chitosan/insulin د 2.5:1 (w/w) څخه لوړ د ډله ایز تناسب کې چمتو شوي وو (شکل 1b). له همدې امله، پدې څیړنه کې د چمتووالي غوره شرایط (pH 6.0، د chitosan/insulin د ډله ایز تناسب 2.5:1) د نورو مطالعاتو لپاره د انسولین بار شوي نانو ذرات چمتو کولو لپاره کارول شوي. د دې چمتووالي حالت لاندې، د انسولین نانو ذرات اوسط ذره اندازه 318 nm (شکل 1c) ته غوره شوې وه، PDI 0.18 وه، د ځای پرځای کولو موثریت 99.4٪ و، د زیټا پوټینشن 9.8 mv و، او د انسولین بار کول 25.01٪ (m/m) وو. د لیږد الکترون مایکروسکوپي (TEM) پایلو پراساس، غوره شوي نانو ذرات تقریبا کروی او جلا وو چې نسبتا یونیفورم اندازه یې درلوده (شکل 1d).
د انسولین نانو ذراتو د پیرامیټر اصلاح کول: (الف) د انسولین نانو ذراتو د اوسط قطر او انکیپسولیشن موثریت (EE) باندې د pH اغیز (د چیټوسان او انسولین د 5:1 ډله ایز تناسب سره چمتو شوی)؛ (ب) چیټوسان او د انسولین NPs د اوسط قطر او انکیپسولیشن موثریت (EE) باندې د انسولین د ډله ایز تناسب اغیزه (په pH 6 سره چمتو شوی)؛ (ج) د مطلوب انسولین نانو ذراتو د ذراتو اندازې ویش؛ (د) د مطلوب انسولین NPs TEM مایکروګراف.
دا ښه معلومه ده چې چایټوسان یو کمزوری پولی الیکټرولیت دی چې pKa یې 6.5 دی. دا په اسیدیک رسنیو کې مثبت چارج کیږي ځکه چې د هغې اصلي امینو ګروپ د هایدروجن ایونونو لخوا پروټونټ شوی دی 15. له همدې امله، دا ډیری وختونه د منفي چارج شوي میکرو مالیکولونو د کیپسول کولو لپاره د کیپر په توګه کارول کیږي. پدې څیړنه کې، چایټوسان د 5.3 د ایزو الیکټریک نقطې سره د انسولین د کیپسول کولو لپاره کارول شوی و. څرنګه چې چایټوسان د پوښ کولو موادو په توګه کارول کیږي، د هغې د تناسب زیاتوالي سره، د نانو پارټیکلونو د بهرنۍ طبقې ضخامت په ورته ډول زیاتیږي، چې پایله یې د لوی اوسط ذرې اندازه ده. برسېره پردې، د چایټوسان لوړه کچه کولی شي ډیر انسولین پوښ کړي. زموږ په قضیه کې، EE ترټولو لوړ و کله چې د چایټوسان او انسولین تناسب 2.5:1 ته ورسید، او په EE کې د پام وړ بدلون نه و کله چې تناسب زیات شو.
د چایټوسان او انسولین د تناسب سربیره، pH د NPs په چمتو کولو کې هم مهم رول لوبولی دی. ګان او نور. ۱۷ د چایټوسان نانو ذراتو د ذرې اندازې باندې د pH اغیز مطالعه کړ. دوی د ذرې اندازې کې دوامداره کمښت وموند تر هغه چې pH 6.0 ته ورسیږي، او د ذرې اندازې کې د پام وړ زیاتوالی په pH > 6.0 کې لیدل شوی، کوم چې زموږ د مشاهدو سره مطابقت لري. دا پدیده د دې حقیقت له امله ده چې د pH زیاتوالي سره، د انسولین مالیکول منفي سطحي چارج ترلاسه کوي، پدې توګه، د چایټوسان/سوډیم ټریپولی فاسفیټ (TPP) کمپلیکس سره د الکتروسټاتیک تعاملاتو ملاتړ کوي، چې پایله یې کوچنۍ ذره اندازه او لوړ EE وي. په هرصورت، کله چې pH 6.5 ته تنظیم شو، په چایټوسان کې امینو ګروپونه ډیپروټونیټ شوي وو، چې په پایله کې د چایټوسان فولډینګ کیږي. په دې توګه، لوړ pH د TPP او انسولین سره د امینو آئنونو د لږ تماس پایله لري، چې پایله یې د کراس لینک ټیټ، د ذرې وروستی اوسط لوی اندازه او د EE ټیټ دی.
د یخچال وچو او سپری وچو NPs د مورفولوژیکي ملکیتونو تحلیل کولی شي د غوره ډیهایډریشن او پوډر جوړولو تخنیکونو انتخاب ته لارښوونه وکړي. غوره شوی میتود باید د درملو ثبات، یونیفورم ذره شکل، د درملو لوړ بار کول او په اصلي محلول کې ښه محلولیت چمتو کړي. پدې څیړنه کې، د دواړو تخنیکونو د ښه پرتله کولو لپاره، د ډیهایډریشن پرمهال د 1٪ مانیتول سره یا پرته انسولین NPs کارول شوي. مانیتول د فریز وچولو او سپری وچولو لپاره په مختلفو وچو پوډر فارمولونو کې د بلکینګ اجنټ یا کریوپروټیکټینټ په توګه کارول کیږي. د مانیتول پرته د لیوفیلائز شوي انسولین نانو پارټیکلونو لپاره، لکه څنګه چې په شکل 2a کې ښودل شوي، د لوی، غیر منظم او ناڅاپه سطحو سره یو ډیر سوری پوډر جوړښت د سکین کولو الکترون مایکروسکوپي (SEM) لاندې لیدل شوی. د ډیهایډریشن وروسته په پوډر کې لږ جلا ذرات کشف شوي (انځور 2e). دې پایلو ښودلې چې ډیری NPs د فریز وچولو پرمهال پرته له کوم کریوپروټیکټینټ څخه تخریب شوي. د یخچال وچو او سپری وچو انسولین نانو پارټیکلونو لپاره چې 1٪ مانیتول لري، د نرمو سطحو سره کروی نانو پارټیکلونه لیدل شوي (انځور). 2b,d,f,h). د مانیتول پرته د سپری وچ شوي انسولین نانو ذرات کروی پاتې شول مګر په سطحه یې غونج شوي وو (انځور 2c). کروی او غونج شوي سطحې په لاندې ډول د خوشې کولو چلند او حجروي جذب ازموینو کې نور بحث شوي دي. د وچو NPs د لید وړ ظهور پراساس، دواړه سپری وچ شوي NPs پرته له مانیتول او NPs منجمد وچ شوي او د مانیتول سره سپری وچ شوي د NPs ښه پوډر ترلاسه کړل (انځور 2f,g,h). د ذراتو سطحو ترمنځ د سطحې ساحه څومره لویه وي، هومره د محلولیت لوړه وي او له همدې امله د خوشې کولو کچه لوړه وي.
د مختلفو ډیهایډریټ شوي انسولین NPs مورفولوژي: (a) د مانیټول پرته د لیوفیل شوي انسولین NPs SEM انځور؛ (b) د مانیټول سره د لیوفیل شوي انسولین NPs SEM انځور؛ (c) د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین NPs SEM انځور؛ (d) د مانیټول سره سپری وچ شوي انسولین NPs SEM انځور؛ (e) د مانیټول پرته د لیوفیل شوي انسولین NPs پوډر انځور؛ (f) د مانیټول سره د لیوفیل شوي انسولین NPs انځور؛ (g) د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین NPs پوډر انځور؛ (h) د مانیټول سره د سپری وچ شوي انسولین NPs پوډر انځور.
د یخ وچولو په جریان کې، مانیتول د کریوپروټیکټینټ په توګه کار کوي، NPs په بې شکله بڼه ساتي او د یخ کرسټالونو لخوا د زیان مخه نیسي19. برعکس، د سپری وچولو په جریان کې د کنګل کولو هیڅ مرحله نشته. له همدې امله په دې طریقه کې مانیتول ته اړتیا نشته. په حقیقت کې، د مانیتول پرته د سپری وچ شوي NPs ښه NPs ترلاسه کړل لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي. په هرصورت، مانیتول لاهم کولی شي د سپری وچولو په پروسه کې د ډکونکي په توګه عمل وکړي ترڅو NPs ته ډیر کروی جوړښت ورکړي20 (انځور 2d)، کوم چې د داسې پوښل شوي NPs یونیفورم خوشې کولو چلند ترلاسه کولو کې مرسته کوي. سربیره پردې، دا روښانه ده چې ځینې لوی ذرات په منجمد وچ شوي او سپری وچ شوي انسولین NPs کې کشف کیدی شي چې مانیتول لري (انځور 2b، d)، کوم چې ممکن د ذرې په کور کې د پوښل شوي انسولین سره یوځای د مانیتول راټولیدو له امله وي. د چیټوسان طبقه. دا د یادونې وړ ده چې پدې څیړنه کې، د دې لپاره چې ډاډ ترلاسه شي چې د ډیهایډریشن وروسته کروی جوړښت روغ پاتې کیږي، د مانیټول او چیټوسان تناسب په 5:1 کې ساتل شوی، ترڅو د ډکونکي لوی مقدار هم د وچو NPs د ذراتو اندازه پراخه کړي.
د فوریر ټرانسفارم انفراریډ ټیټ شوی ټول انعکاس (FTIR-ATR) سپیکٹروسکوپي د وړیا انسولین، چیټوسان، چیټوسان، TPP او انسولین فزیکي مخلوط مشخص کړ. ټول ډیهایډریټ شوي NPs د FTIR-ATR سپیکٹروسکوپي په کارولو سره مشخص شوي. د پام وړ، د 1641، 1543 او 1412 سانتي متره - 1 بانډ شدتونه په کیپسول شوي NPs کې چې د مانیټول سره په فریز وچ شوي او په سپری وچ شوي NPs کې چې د مانیټول سره او پرته (انځور 3) لیدل شوي. لکه څنګه چې مخکې راپور شوی، د ځواک دا زیاتوالی د چیټوسان، TPP او انسولین ترمنځ د کراس لینک کولو سره تړاو درلود. د چیټوسان او انسولین ترمنځ د تعامل څیړنې ښودلې چې د انسولین بار شوي چیټوسان نانو پارټیکلونو د FTIR سپیکٹرا کې، د چیټوسان بینډ د انسولین سره یوځای شوی، د کاربونیل شدت (1641 سانتي متره - 1) او امین (1543 سانتي متره - 1) بیلټ زیاتوي. د TPP ټرایپولیفاسفیټ ګروپونه د امونیم سره تړلي دي. په چیټوسان کې ګروپونه، چې په ۱۴۱۲ سانتي متره-۱ کې یو بانډ جوړوي.
د وړیا انسولین، چایټوسان، د چایټوسان/TPP/انسولین فزیکي مخلوط او NPs د مختلفو میتودونو لخوا ډیهایډریټ شوي FTIR-ATR سپیکٹرا.
سربیره پردې، دا پایلې د هغو سره سمون لري چې په SEM کې ښودل شوي، کوم چې ښودلې چې د کیپسول شوي NPs دواړه د سپری کولو او منجمد وچولو په وخت کې د مانیټول سره سم پاتې شوي، مګر د مانیټول په نشتوالي کې، یوازې د سپری وچولو سره کیپسول شوي ذرات تولید شوي. برعکس، د مانیټول پرته د منجمد وچو NPs FTIR-ATR سپیکٹرل پایلې د چایټوسان، TPP، او انسولین فزیکي مخلوط سره خورا ورته وې. دا پایله ښیي چې د چایټوسان، TPP او انسولین ترمنځ کراس لینکونه نور د مانیټول پرته په منجمد وچو NPs کې شتون نلري. د NPs جوړښت د کریوپروټیکټینټ پرته د منجمد وچولو په جریان کې ویجاړ شوی و، کوم چې د SEM پایلو کې لیدل کیدی شي (انځور 2a). د ډیهایډریټ شوي انسولین NPs مورفولوژي او FTIR پایلو پراساس، یوازې لیوفیلیز شوي، سپری وچ شوي، او مانیټول وړیا NPs د بیارغونې تجربو او مانیټول وړیا NPs لپاره کارول شوي و ځکه چې د مانیټول وړیا NPs د تخریب په جریان کې. د اوبو کمښت. بحث وکړئ.
ډیهایډریشن د اوږدې مودې ذخیره کولو او نورو فورمولونو ته د بیا پروسس کولو لپاره کارول کیږي. د وچو NPs وړتیا چې د ذخیره کولو وروسته بیا جوړ شي د دوی په مختلفو فورمولونو لکه ټابلیټونو او فلمونو کې د کارولو لپاره خورا مهم دی. موږ ولیدل چې د مانیټول په نشتوالي کې د سپری وچ شوي انسولین NPs اوسط ذره اندازه د بیا جوړیدو وروسته یوازې یو څه زیاته شوه. له بلې خوا، د مانیټول سره د سپری وچ شوي او منجمد وچ شوي انسولین نانو پارټیکلونو د ذرې اندازه د پام وړ لوړه شوه (جدول 1). پدې څیړنه کې د ټولو NPs د بیا ترکیب وروسته PDI او EE د پام وړ بدلون نه دی راغلی (p > 0.05). دا پایله ښیې چې ډیری ذرات د بیا حل کیدو وروسته سم پاتې دي. په هرصورت، د مانیټول اضافه کول د لیوفیلائز شوي او سپری وچ شوي مانیټول نانو پارټیکلونو د انسولین بار کولو کې د پام وړ کمښت لامل شو (جدول 1). برعکس، د مانیټول پرته د سپری وچ شوي NPs د انسولین بار مینځپانګه د پخوا په څیر پاتې شوه (جدول 1).
دا ښه معلومه ده چې د نانو پارټیکلونو بار کول هغه وخت خورا مهم دي کله چې د درملو رسولو موخو لپاره کارول کیږي. د ټیټ بار کولو سره NPs لپاره، د درملنې حد ته رسیدو لپاره خورا لوی مقدار موادو ته اړتیا ده. په هرصورت، د NP دومره لوړ غلظت لوړ واسکاسیټي په ترتیب سره د شفاهي ادارې او انجیکشن وړ فورمولونو کې د تکلیف او ستونزې لامل کیږي 22. سربیره پردې، د انسولین NPs د ټابلیټونو او ویسکوس بایوفلمونو جوړولو لپاره هم کارول کیدی شي 23، 24، کوم چې د ټیټ بار کولو کچې کې د NPs لوی مقدار کارولو ته اړتیا لري، چې په پایله کې لوی ټابلیټونه او موټی بایوفلمونه رامینځته کیږي چې د شفاهي غوښتنلیکونو لپاره مناسب ندي. له همدې امله، د لوړ انسولین بار سره ډیهایډریټ شوي NPs خورا مطلوب دي. زموږ پایلې وړاندیز کوي چې د مانیټول فری سپری وچ شوي NPs لوړ انسولین بار کولی شي د دې بدیل تحویلي میتودونو لپاره ډیری زړه راښکونکي ګټې وړاندې کړي.
ټول ډیهایډریټ شوي NPs د دریو میاشتو لپاره په یخچال کې ساتل شوي وو. د SEM پایلو ښودلې چې د ټولو ډیهایډریټ شوي NPs مورفولوژي د دریو میاشتو ذخیره کولو په جریان کې د پام وړ بدلون نه دی راوستی (شکل 4). په اوبو کې د بیا رغونې وروسته، ټولو NPs په EE کې یو څه کمښت ښودلی او د دریو میاشتو ذخیره کولو دورې په جریان کې یې نږدې لږ مقدار (~ 5٪) انسولین خوشې کړی (جدول 2). په هرصورت، د ټولو نانو ذراتو اوسط ذره اندازه زیاته شوې. د مانیټول پرته د سپری وچ شوي NPs د ذرې اندازه 525 nm ته لوړه شوې، پداسې حال کې چې د سپری وچ شوي او منجمد وچ شوي NPs د مانیټول سره په ترتیب سره 872 او 921 nm ته لوړه شوې (جدول 2).
د دریو میاشتو لپاره ساتل شوي د مختلفو ډیهایډریټ شوي انسولین NPs مورفولوژي: (a) د مانیټول سره د لیوفیلائز شوي انسولین NPs SEM انځور؛ (b) د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین نانو پارټیکلونو SEM انځور؛ (c) د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین NPs SEM انځورونه.
سربېره پردې، د انسولین نانو ذرات چې د مانیټول سره سپری وچ شوي او په فریز وچ شوي (انځور S2) کې بیا جوړ شوي، د پریکپیټیټس لیدل شوي. دا ممکن د لویو ذراتو له امله رامینځته شي چې په اوبو کې په سمه توګه نه ځړیږي. پورته ټولې پایلې ښیې چې د سپری وچولو تخنیک کولی شي د انسولین نانو ذرات د ډیهایډریشن څخه خوندي کړي او د انسولین نانو ذرات لوړ بار کول پرته له کوم فلر یا کریوپروټیکټینټ ترلاسه کیدی شي.
د انسولین ساتل د pH = 2.5 منځنۍ کچې کې د پیپسین، ټریپسین، او α-کیموټریپسین سره ازمول شوي ترڅو د ډیهایډریشن وروسته د انزایمیک هضم په وړاندې د NPs محافظتي وړتیا وښيي. د ډیهایډریشن شوي NPs انسولین ساتل د تازه چمتو شوي NPs سره پرتله شوي، او وړیا انسولین د منفي کنټرول په توګه کارول شوی. پدې څیړنه کې، وړیا انسولین په ټولو دریو انزایمیک درملنو کې د 4 ساعتونو دننه د انسولین چټک له منځه وړل ښودلي (انځور 5a-c). برعکس، د مانیټول سره د منجمد وچ شوي NPs او د مانیټول سره یا پرته د سپری وچ شوي NPs د انسولین له منځه وړلو ازموینې د انزایمیک هضم په وړاندې د دې NPs د پام وړ لوړ محافظت ښودلی، کوم چې د تازه چمتو شوي انسولین NPs سره ورته و (شکل 1).5a-c). په پیپسین، ټریپسین، او α-کیموټریپسین کې د نانو ذراتو په مرسته، په ترتیب سره د 50٪، 60٪، او 75٪ څخه ډیر انسولین په 4 ساعتونو کې خوندي کیدی شي (انځور 5a-c). دا د انسولین محافظتي وړتیا ممکن د وینې جریان کې د انسولین د لوړ جذب چانس زیات کړي25. دا پایلې وړاندیز کوي چې د مانیټول سره یا پرته د سپرې وچول او د مانیټول سره په یخچال کې وچول کولی شي د ډیهایډریشن وروسته د NPs د انسولین محافظتي وړتیا وساتي.
د ډیهایډریټ شوي انسولین NPs ساتنه او خوشې کولو چلند: (a) د پیپسین محلول کې د انسولین ساتنه؛ (b) د ټریپسین محلول کې د انسولین ساتنه؛ (c) د α-کیموټریپسین محلول لخوا د انسولین ساتنه؛ (d) په pH = 2.5 محلول کې د ډیهایډریټ شوي NPs خوشې کولو چلند؛ (e) په pH = 6.6 محلول کې د ډیهایډریټ شوي NPs خوشې کولو چلند؛ (f) په pH = 7.0 محلول کې د ډیهایډریټ شوي NPs خوشې کولو چلند.
تازه چمتو شوي او بیا جوړ شوي وچ انسولین NPs په مختلفو بفرونو (pH = 2.5، 6.6، 7.0) کې په 37 درجو سانتی ګراد کې انکیوبیټ شوي، د معدې، ډیوډینم، او پورتنۍ کوچنۍ کولمو د pH چاپیریال تقلید کوي، ترڅو د انسولین مقاومت باندې د انسولین اغیز معاینه کړي. په مختلفو چاپیریالونو کې د خوشې کیدو چلند. د معدې د لارې ټوټه. په pH = 2.5 کې، د انسولین بار شوي NPs او حل شوي وچ انسولین NPs په لومړي یو ساعت کې د لومړني برسټ خوشې کیدو ښودنه وکړه، وروسته په راتلونکو 5 ساعتونو کې ورو خوشې کیدو سره (انځور 5d). په پیل کې دا چټک خوشې کیدل ډیری احتمال د پروټین مالیکولونو د چټک سطحې تخریب پایله ده چې د ذرې داخلي جوړښت کې په بشپړ ډول غیر متحرک ندي. په pH = 6.5 کې، د انسولین بار شوي NPs او بیا جوړ شوي وچ انسولین NPs په 6 ساعتونو کې یو اسانه او ورو خوشې کیدو ښودلی، ځکه چې د ازموینې محلول pH د NPs چمتو شوي محلول سره ورته و (انځور 5e). په pH = 7 کې، NPs بې ثباته وو او تقریبا په بشپړ ډول په لومړیو دوو ساعتونو کې تجزیه شوي وو (انځور 5f). دا ځکه چې د چیټوسان ډیپروټونیشن په لوړ pH کې واقع کیږي، کوم چې د لږ کمپیکٹ پولیمر شبکې او د بار شوي انسولین خوشې کیدو پایله لري.
سربیره پردې، د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین NPs د نورو ډیهایډریټ شوي NPs په پرتله د ګړندي خوشې کیدو پروفایل ښودلی (انځور 5d–f). لکه څنګه چې مخکې تشریح شوي، د مانیټول پرته وچ شوي بیا جوړ شوي انسولین NPs د ذراتو ترټولو کوچنۍ اندازه ښودلې. کوچني ذرات د سطحې لویه ساحه چمتو کوي، نو ډیری اړونده درمل به د ذراتو سطحې ته یا نږدې وي، چې په پایله کې د درملو چټک خوشې کیدو لامل کیږي 26.
د NPs سایټوټوکسیکیت د MTT ازموینې لخوا وڅیړل شو. لکه څنګه چې په شکل S4 کې ښودل شوي، ټول ډیهایډریټ شوي NPs د 50-500 μg/ml غلظت کې د حجرو په ژوندي پاتې کیدو باندې د پام وړ اغیزه نلري، دا وړاندیز کوي چې ټول ډیهایډریټ شوي NPs د درملنې کړکۍ ته د رسیدو لپاره په خوندي ډول کارول کیدی شي.
ځیګر هغه اصلي ارګان دی چې له لارې یې انسولین خپل فزیولوژیکي دندې ترسره کوي. د HepG2 حجرې د انسان د هیپاټوما حجرو یوه کرښه ده چې معمولا د ان ویټرو هیپاټوسایټ اپټیک ماډل په توګه کارول کیږي. دلته، د HepG2 حجرې د فریز وچولو او سپری وچولو میتودونو په کارولو سره د ډیهایډریټ شوي NPs د حجرو جذب ارزولو لپاره کارول شوي. د 25 μg/mL غلظت کې د وړیا FITC انسولین سره د څو ساعتونو انکیوبیشن وروسته د کنفوکل لیزر سکین کولو له لارې د حجرو جذب، تازه چمتو شوي FITC انسولین بار شوي NPs او ډیهایډریټ شوي FITC انسولین بار شوي NPs د مساوي انسولین غلظت کې د کمیتي مایکروسکوپي (CLSM) مشاهدې ترسره شوې. د مانیټول پرته لیوفیلیز شوي NPs د ډیهایډریشن په جریان کې ویجاړ شوي او پدې ازموینه کې نه دي ارزول شوي. د تازه چمتو شوي انسولین بار شوي NPs، د مانیټول سره لیوفیلیز شوي NPs، او د مانیټول پرته سپری وچ شوي NPs (شکل 6a) د انټرا سیلولر فلوروسینس شدت 4.3، 2.6 وو. په ترتیب سره د وړیا انسولین په پرتله 2.4، او 4.1 ځله لوړ. د FITC-انسولین ګروپ، (انځور 6b). دا پایلې وړاندیز کوي چې انکیپسول شوی انسولین د وړیا انسولین په پرتله د حجرو جذب کې ډیر قوي دی، په عمده توګه د مطالعې کې تولید شوي انسولین بار شوي نانو پارټیکلونو کوچنۍ اندازې له امله.
د تازه چمتو شوي NPs او ډیهایډریټ شوي NPs سره د 4 ساعتونو انکیوبیشن وروسته د HepG2 حجرو جذب: (a) د HepG2 حجرو لخوا د FITC-انسولین جذب ویش. (b) د فلوروسینس شدت جیومیټریک اوسط د جریان سایټومیټري لخوا تحلیل شوی (n = 3)، *P < 0.05 د وړیا انسولین سره پرتله کول.
په ورته ډول، د CLSM انځورونو وښودله چې د تازه چمتو شوي FITC-انسولین-لوډ شوي NPs او FITC-انسولین-لوډ شوي سپری وچ شوي NPs (پرته له مانیتول) د FITC فلوروسینس شدت د نورو نمونو په پرتله خورا پیاوړی و (شکل 6a). سربیره پردې، د مانیتول اضافه کولو سره، د محلول لوړ واسکاسیټي د حجروي جذب په وړاندې مقاومت زیات کړ، چې په پایله کې یې د انسولین تکثیر کم شو. دا پایلې وړاندیز کوي چې د مانیتول څخه پاک سپری وچ شوي NPs د حجروي جذب ترټولو لوړ موثریت ښودلی ځکه چې د دوی د ذرو اندازه د بیا تحلیل وروسته د یخ وچ شوي NPs په پرتله کوچنۍ وه.
چیټوسان (اوسط مالیکولي وزن 100 KDa، 75-85٪ ډیسیټیل شوی) د سیګما-الډریچ څخه اخیستل شوی و. (اوکویل، اونټاریو، کاناډا). سوډیم ټرایپولیفاسفیټ (TPP) د VWR (راډنور، پنسلوانیا، امریکا) څخه اخیستل شوی و. پدې څیړنه کې کارول شوي بیا جوړونکي انساني انسولین د فشر ساینسي (والټم، MA، امریکا) څخه و. فلوریسین ایزوتیوسایانټ (FITC) لیبل شوی انساني انسولین او 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) د سیګما-الډریچ څخه اخیستل شوي و. (اوکویل، اونټاریو، کاناډا). د HepG2 حجرو لاین د ATCC (ماناساس، ورجینیا، امریکا) څخه ترلاسه شوی و. نور ټول ریجنټونه تحلیلي یا کروماتګرافیک درجې وو.
د 1 ملی ګرامه/ملی لیتر CS محلول په دوه ګوني اوبو (DD اوبو) کې چې 0.1٪ اسیتیک اسید لري حل کړئ. د TPP او انسولین 1 ملی ګرامه/ملی لیتر محلولونه په ترتیب سره د DD اوبو او 0.1٪ اسیتیک اسید کې حل کولو سره چمتو کړئ. پری ایمولشن د پولیټرون PCU-2-110 لوړ سرعت هوموجنیزر (برینکمن انډ. ویسټبري، نیویارک، امریکا) سره چمتو شوی و. د چمتو کولو پروسه په لاندې ډول ده: لومړی، د TPP محلول 2 ملی لیتر د انسولین محلول ته اضافه کیږي، او مخلوط د 30 دقیقو لپاره مخلوط کیږي او په بشپړ ډول مخلوط کیږي. بیا، مخلوط محلول د لوړ سرعت محرک (10,000 rpm) لاندې د سرنج له لارې د CS محلول ته د څاڅکو په څیر اضافه شو. مخلوطونه د یخ حمام کې د 30 دقیقو لپاره د لوړ سرعت محرک (15,000 rpm) لاندې ساتل شوي وو، او دوی د کراس لینک شوي انسولین NPs ترلاسه کولو لپاره یو ټاکلی pH ته تنظیم شوي وو. د انسولین د ذراتو اندازه نور هم همجنس کول او کمول NPs، دوی د پروب ډول سونیکټر (UP 200ST، Hielscher Ultrasonics، Teltow، جرمني) په کارولو سره په یخ حمام کې د اضافي 30 دقیقو لپاره سونیکیټ شوي وو.
د انسولین NPS د Z-اوسط قطر، پولی ډیسپرسیټي شاخص (PDI) او زیټا پوټینشیل لپاره د متحرک رڼا توزیع (DLS) اندازه کولو په کارولو سره د لیټیزایزر 500 (انټون پار، ګرز، اتریش) په کارولو سره د 25 درجو سانتي ګراد په DD اوبو کې د کمولو سره ازمول شوي. مورفولوژي او د اندازې ویش د هیتاچي H7600 لیږد الکترون مایکروسکوپ (TEM) (هتاچي، ټوکیو، جاپان) لخوا مشخص شوی، او انځورونه وروسته د هیتاچي امیجنگ سافټویر (هتاچي، ټوکیو، جاپان) په کارولو سره تحلیل شوي. د انسولین NPs د انکیپسولیشن موثریت (EE) او بارولو ظرفیت (LC) ارزولو لپاره، NPs د 100 kDa مالیکولر وزن کټ آف سره الټرا فلټریشن ټیوبونو ته پایپټ شوي او د 30 دقیقو لپاره په 500 xg کې سینټرفیوج شوي. په فلټریټ کې غیر کیپسول شوي انسولین د Agilent 1100 لړۍ HPLC سیسټم (Agilent، سانټا کلارا، کالیفورنیا، متحده ایالاتو) په کارولو سره اندازه شوی چې پکې شامل دي. څلور اړخیز پمپ، اتومات نمونه اخیستونکی، د ستون ګرمونکی، او د DAD کشف کونکی. انسولین د C18 ستون (زورباکس، 3.5 μm، 4.6 mm × 150 mm، Agilent، USA) لخوا تحلیل شو او په 214 nm کې کشف شو. ګرځنده مرحله اسټونایټریل او اوبه وې، چې 0.1٪ TFA لري، د 10/90 څخه تر 100/0 پورې د تدریجي تناسب، او د 10 دقیقو لپاره چلول شوې. ګرځنده مرحله د 1.0 ملی لیتر/دقیقې د جریان په کچه پمپ شوه. د ستون تودوخه 20 °C ته ټاکل شوې وه. د مساواتو په کارولو سره د EE او LC سلنه محاسبه کړئ. (1) او مساوات (2).
د انسولین NP د اصلاح کولو لپاره د 2.0 څخه تر 4.0 پورې د CS/انسولین مختلف تناسبونه ازمول شوي. د چمتووالي په جریان کې د CS محلول مختلف مقدارونه اضافه شوي، پداسې حال کې چې د انسولین/TPP مخلوط ثابت ساتل شوی و. د ټولو محلولونو (انسولین، TPP او CS) اضافه کولو وروسته د مخلوط pH په احتیاط سره کنټرول کولو سره د انسولین NPs د 4.0 څخه تر 6.5 پورې د pH حد کې چمتو شوي. د انسولین نانو ذرات EE او د ذراتو اندازه د مختلفو pH ارزښتونو او CS/انسولین ډله ایز تناسب کې ارزول شوې ترڅو د انسولین NPs جوړښت غوره کړي.
د انسولین غوره شوي NPs په المونیم کانټینر کې ځای پر ځای شوي وو او د ټیپ سره ټینګ شوي نسج سره پوښل شوي وو. وروسته، پیچ شوي کانټینرونه د لیبکونکو فری زون فریز وچونکي (لیبکونکو، کنساس ښار، MO، USA) کې ځای پر ځای شوي وو چې د ټری وچونکي سره سمبال وو. د تودوخې او ویکیوم فشار په -10 °C، د لومړیو 2 ساعتونو لپاره 0.350 تور، او د 24 ساعتونو پاتې 22 ساعتونو لپاره 0 °C او 0.120 تور کې ټاکل شوی و ترڅو وچ انسولین NPs ترلاسه کړي.
د بوچي مینی سپری وچونکی B-290 (BÜCHI، فلاویل، سویزرلینډ) د انکیپسول شوي انسولین تولید لپاره کارول شوی و. د وچولو غوره شوي پیرامیټرونه دا وو: تودوخه 100 °C، د خوړو جریان 3 لیټره/ دقیقه، او د ګاز جریان 4 لیټره/ دقیقه.
د ډیهایډریشن څخه مخکې او وروسته د انسولین NPs د FTIR-ATR سپیکٹروسکوپي په کارولو سره مشخص شوي. ډیهایډریټ شوي نانو ذرات او همدارنګه وړیا انسولین او چیټوسان د سپیکٹرم 100 FTIR سپیکٹرو فوټومیټر (پرکین ایلمر، والټم، میساچوسټس، متحده ایالات) په کارولو سره تحلیل شوي چې د نړیوال ATR نمونې اخیستنې لوازمو (پرکین ایلمر، والټم، میساچوسټس، متحده ایالات) سره سمبال شوي. د سیګنال اوسط د 16 سکینونو څخه د 4 cm2 ریزولوشن کې د 4000-600 cm2 فریکونسۍ رینج کې ترلاسه شوي.
د وچو انسولین NPs مورفولوژي د یخ وچو او سپری وچو انسولین NPs د SEM انځورونو لخوا ارزول شوې چې د هیلیوس نانو لیب 650 فوکس شوي آیون بیم سکیننګ الیکټرون مایکروسکوپ (FIB-SEM) (FEI، هیلزبورو، اوریګون، امریکا) لخوا اخیستل شوي. کارول شوی اصلي پیرامیټر ولټاژ 5 keV او اوسنی 30 mA و.
ټول ډیهایډریټ شوي انسولین NPs په dd اوبو کې بیا حل شول. د ذراتو اندازه، PDI، EE او LC د ډیهایډریټ وروسته د دوی کیفیت ارزولو لپاره د مخکې ذکر شوي ورته میتود په کارولو سره بیا ازمول شوي. د انهایډرو انسولین NPs ثبات هم د اوږدې مودې ذخیره کولو وروسته د NPs ملکیتونو ازموینې سره اندازه شوی. پدې څیړنه کې، د ډیهایډریټ وروسته ټول NPs د دریو میاشتو لپاره په یخچال کې زیرمه شوي. د دریو میاشتو ذخیره کولو وروسته، NPs د مورفولوژیکي ذراتو اندازې، PDI، EE او LC لپاره ازمول شوي.
د بیا جوړ شوي NPs 5 ملی لیتر په 45 ملی لیتر کې حل کړئ چې د معدې مایع (pH 1.2، 1٪ پیپسین لري)، د کولمو مایع (pH 6.8، 1٪ ټریپسین لري) یا د کیموټریپسین محلول (100 g/mL، په فاسفیټ بفر کې، pH 7.8) لري ترڅو د ډیهایډریشن وروسته د NPs په ساتنه کې د انسولین اغیزمنتوب ارزونه وکړي. دوی په 37 درجو سانتي ګراد کې د 100 rpm د حرکت سرعت سره انکیوبیټ شوي وو. د محلول 500 μL په مختلفو وختونو کې راټول شوي او د انسولین غلظت د HPLC لخوا ټاکل شوی و.
د تازه چمتو شوي او ډیهایډریټ شوي انسولین NPs د ان ویټرو خوشې کولو چلند د ډایالیسس کڅوړې میتود (مالیکولر وزن کټ آف 100 kDa، سپیکٹرا پور انکارپوریشن) لخوا ازمول شوی. تازه چمتو شوي او بیا جوړ شوي وچ NPs په pH 2.5، pH 6.6، او pH 7.0 (0.1 M فاسفیټ بفر شوي مالګین، PBS) کې په مایعاتو کې ډایالیسس شوي ترڅو په ترتیب سره د معدې، ډیوډینم، او پورتنۍ کوچنۍ کولمو pH چاپیریال تقلید کړي. ټولې نمونې په 200 rpm کې د دوامداره ټکان سره په 37 ° C کې انکیوبیټ شوي. د 5 mL ډایالیسس کڅوړې څخه بهر مایع په لاندې وختونو کې وخورئ: 0.5، 1، 2، 3، 4، او 6 h، او سمدلاسه حجم د تازه ډایالیسسیټ سره ډک کړئ. په مایع کې د انسولین ککړتیا د HPLC لخوا تحلیل شوې، او د نانو پارټیکلونو څخه د انسولین خوشې کیدو کچه د خوشې شوي وړیا انسولین تناسب څخه محاسبه شوې چې په نانو پارټیکلونو کې ټول انسولین پوښل شوي (مساوات 3).
د انسان د هیپاټو سیلولر کارسنوما حجرو لاین HepG2 حجرات د 60 ملي میتر قطر لوښو کې د ډلبیکو د تعدیل شوي عقاب میډیم (DMEM) په کارولو سره کرل شوي چې پکې 10٪ د جنین غواګانو سیرم، 100 IU/mL پنسلین، او 100 μg/mL سټریپټومیسین شامل دي. کلتورونه په 37 درجو سانتي ګراد، 95٪ نسبي رطوبت، او 5٪ CO2 کې ساتل شوي. د جذب ازموینې لپاره، د HepG2 حجرات په 1 × 105 حجرو/ml کې د 8 څاه نانک لیب-ټیک چیمبر سلایډ سیسټم (ترمو فشر، نیویارک، امریکا) کې تخم شوي. د سایټوټوکسیسیټي ازموینې لپاره، دوی په 96 څاه پلیټونو (کارنینګ، نیویارک، امریکا) کې د 5 × 104 حجرو/ml کثافت سره تخم شوي.
د MTT ازموینه د تازه چمتو شوي او ډیهایډریټ شوي انسولین NPs30 د سایټوټوکسیکیت ارزولو لپاره کارول شوې وه. د HepG2 حجرات په 96 څاه پلیټونو کې د 5 × 104 حجرو/mL کثافت کې تخم شوي او د ازموینې دمخه د 7 ورځو لپاره کلتور شوي. د انسولین NPs په کلتوري میډیم کې مختلف غلظت (50 څخه تر 500 μg/mL) ته حل شوي او بیا حجرو ته اداره کیږي. د 24 ساعتونو انکیوبیشن وروسته، حجرات 3 ځله د PBS سره مینځل شوي او د 0.5 mg/ml MTT لرونکي میډیم سره د 4 ساعتونو لپاره انکیوبیټ شوي. د ټیکان انفینیټ M200 پرو سپیکٹروفوټومیټر پلیټ ریډر (ټیکان، مینیډورف، سویزرلینډ) په کارولو سره د 570 nm په اندازه د ژیړ ټیټرازولیم MTT ارغواني فارمازان ته د انزایمیک کمښت اندازه کولو سره د سایټوټوکسیکیت ارزول شوی.
د NPs د حجروي جذب موثریت د کنفوکال لیزر سکینینګ مایکروسکوپي او د جریان سایټومیټري تحلیل لخوا ازمول شوی. د Nunc Lab-Tek چیمبر سلایډ سیسټم هر څاه د وړیا FITC-انسولین، FITC-انسولین بار شوي NPs سره درملنه شوې، او په ورته غلظت کې د 25 μg/mL ډیهایډریټ شوي FITC-انسولین NPs بیا جوړ شوي او د 4 ساعتونو لپاره انکیوبیټ شوي. حجرې 3 ځله د PBS سره مینځل شوي او د 4٪ پارافارمالډیهایډ سره تنظیم شوي. نیوکلی د 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) سره رنګ شوي. د انسولین ځایی کول د اولمپس FV1000 لیزر سکینینګ/دوه فوټون کنفوکال مایکروسکوپ (اولمپوس، شینجوکو ښار، ټوکیو، جاپان) په کارولو سره لیدل شوي. د جریان سایټومیټري تحلیل لپاره، د 10 μg/mL وړیا FITC-انسولین، FITC-انسولین بار شوي NPs، او حل شوي ډیهایډریټ شوي FITC-انسولین NPs ورته غلظت اضافه شوي. ۹۶ څاه ګانې د HepG2 حجرو سره تخم شوي او د ۴ ساعتونو لپاره انکیوبیټ شوي. د ۴ ساعتونو انکیوبیټ وروسته، حجرې لرې شوې او د FBS سره ۳ ځله مینځل شوې. په هر نمونه کې ۵ × ۱۰۴ حجرې د BD LSR II فلو سایټومیټر (BD، فرانکلین لیکس، نیو جرسي، متحده ایالات) لخوا تحلیل شوې.
ټول ارزښتونه د اوسط ± معیاري انحراف په توګه څرګند شوي. د ټولو ډلو ترمنځ پرتله کول د یو اړخیز ANOVA یا t-ټیسټ په کارولو سره د IBM SPSS احصایې 26 لخوا د Mac (IBM، Endicott، نیویارک، USA) لپاره ارزول شوي او p < 0.05 د احصایوي پلوه مهم ګڼل شوي.
دا څیړنه د کراس لینک شوي چیټوسان/TPP/انسولین نانو ذرات ډیهایډریټ کولو لپاره د سپری وچولو انعطاف او وړتیا ښیې چې د معیاري فریز وچولو میتودونو په پرتله چې د بلکینګ اجنټانو یا کریوپروټیکټینټونو ظرفیت او لوړ بار ظرفیت کاروي د ښه بیارغونې سره. د انسولین غوره شوي نانو ذرات د اوسط ذرې اندازه 318 nm او د 99.4٪ د انکیپسولیشن موثریت ترلاسه کړ. د ډیهایډریشن وروسته د SEM او FTIR پایلو وښودله چې کروی جوړښت یوازې د سپری وچ شوي NPs کې د مانیټول سره او پرته ساتل شوی و او د مانیټول سره لیوفیلیز شوی و، مګر د مانیټول پرته لیوفیلیز شوی NPs د ډیهایډریشن پرمهال تجزیه شوي. د بیارغونې وړتیا ازموینې کې، د مانیټول پرته د سپری وچ شوي انسولین نانو ذرات د ذرې کوچنۍ منځنۍ اندازه او د بیارغونې پرمهال ترټولو لوړ بار ښودلی. د دې ټولو ډیهایډریټ شوي NPs خوشې کولو چلند ښودلی چې دوی په چټکۍ سره د pH = 2.5 او pH = 7 په محلولونو کې خوشې شوي، او د pH = 6.5 په محلول کې خورا مستحکم دي. د نورو بیا حل شوي ډیهایډریټ شوي NPs په پرتله، NPs د مانیتول پرته د سپری وچو شویو موادو تر ټولو چټکه خوشې کول ښودلي دي. دا پایله د حجروي جذب په ازموینه کې لیدل شوي سره مطابقت لري، ځکه چې د مانیتول په نشتوالي کې د سپری وچو شویو موادو NPs تقریبا په بشپړ ډول د تازه چمتو شوي NPs د حجروي جذب موثریت ساتلی دی. دا پایلې وړاندیز کوي چې د مانیتول څخه پاک سپری وچولو لخوا چمتو شوي وچ انسولین نانو ذرات د نورو غیر هایدروس خوراک بڼو کې د پروسس کولو لپاره خورا مناسب دي، لکه د شفاهي ټابلیټونو یا بایو چپکونکي فلمونو.
د فکري ملکیت د ستونزو له امله، هغه معلومات چې د اوسني مطالعې په جریان کې تولید شوي او/یا تحلیل شوي دي په عامه توګه شتون نلري، مګر د اړوندو لیکوالانو څخه د مناسب غوښتنې په صورت کې شتون لري.
کاګان، الف. د شکر ناروغۍ دوهم ډول: ټولنیز او علمي سرچینې، طبي پیچلتیاوې، او د ناروغانو او نورو لپاره اغیزې. (مک فارلین، ۲۰۰۹).
سینګ، ای پي، ګو، وای.، سینګ، اې، ژی، ډبلیو او جیانګ، پي. د انسولین انکیپسولیشن پراختیا: ایا اوس د خولې له لارې اداره کول ممکن دي؟ جي. فارمیسی. بایو-فارماسی.ریزروائر.۱، ۷۴-۹۲ (۲۰۱۹).
وانګ، سي وائی، السلمی، ایچ. او داس، سي آر د شکر ناروغۍ د درملنې لپاره د شفاهي انسولین بار شوي لیپوزوم رسولو سیسټمونو کې وروستي پرمختګونه. تفسیر. جي. فارمسي.۵۴۹، ۲۰۱-۲۱۷ (۲۰۱۸).